CN101677944A - 稳定的非含水药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及贮存稳定的非含水药物组合物，以及涉及它们在治疗糖尿病和高血糖的方法中的用途，其中所述非含水药物组合物包含10－100个氨基酸的脱水治疗活性多肽，和至少一种半极性质子有机溶剂。

Description

稳定的非含水药物组合物
发明领域
本发明涉及非含水(non-aqueous)药物组合物，以及涉及它们在治疗糖尿病和高血糖的方法中的用途。
发明背景
除了某些非质子溶剂如二甲亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺和二甲基甲酰胺，多肽在大多数非含水溶剂中一般具有低溶解度。然而，这些非质子溶剂的毒性使它们不适合用于以任何显著的程度用于药物制剂。
Klibanov et al(J.T.Chin，S.L.Wheeler，and A.M.Klibanov.Communication to the editor：On protein solubility in organic solvents.BIOTECHNOL.BIOENG.44(1)：140-145，1994)描述了质子溶剂、强亲水性溶剂和极性溶剂溶解超过10mg/ml的溶菌酶(从pH 6.0的水溶液冻干)。当溶菌酶在溶解在戊二醇之前从其中pH值被调节到低于溶菌酶的等电点的水溶液中冻干时，在单独的溶剂(1，5戊二醇)中的溶解度显著增加。在溶剂特征和溶菌酶的溶解度之间不能建立强相关性。
WO 00/42993描述了用于大分子递送的制剂，其中所述大分子被溶解或分散在低毒性有机溶剂，其可以被气溶胶化，以通过吸入递送到患者肺部。
许多有机极性质子溶剂易于使多肽不稳定，原因在于多肽的部分解折叠，这通常由于较高的构象挠性而显著增强聚集和化学降解过程。一些有机极性质子溶剂如乙醇可能甚至用作多肽的变性剂。而且，有机极性质子溶剂常常包含少量的高活性杂质，诸如醛和酮，这危害多肽的稳定性。因此，难以配制具有足够的贮存期稳定性的多肽非含水溶液。
因为非含水多肽溶液可以被进一步加工成溶液加压计量吸入剂(pMDI)，其中极性非含水溶剂作为助溶剂，以使将溶解在氟烷中的多肽可以被有利地用于肺部施用。
通过添加去污剂和非极性疏水性溶剂诸如油类，非含水多肽溶液还可以被加工成用于口服的微乳剂。微乳剂可保护多肽免受蛋白水解降解和增强多肽从胃肠道的全身吸收。而且，可以预期，多肽的水解在非含水制剂中得以最小化，原因在于水分活性低。
各种处理和赋形剂的添加经常必须被施加于治疗性肽的非含水药物组合物，以改善它们的溶解度和它们的稳定性。
肽的液体肠道外制剂的贮存期必须至少一年，优选更久。其中产品可以在环境温度下被运输和每日摇动的使用期间优选应该为几个星期。
因此，对于具有改善的稳定性的治疗性肽的非含水药物组合物存在需求。
附图概述
图1.在环境温度下门冬胰岛素(insulin aspart)在丙二醇中的溶解度之间的关系，其作为在水中重构的门冬胰岛素的pH(靶pH)的函数。
图2.在环境温度门冬胰岛素(靶pH：7.5)在各种半极性质子溶剂中的溶解度。
图3.在37℃在生理学培养基(pH 7.4)中温育2小时之后，在10％(v/v)丙二醇(PG)存在或不存在的情况下渗透通过新切除的大鼠肠管(近端空肠)的人胰岛素。
图4.MALDI分析显示出在两个缓冲液对照样品(S3和S6)的每一个和在两个含样品的丙二醇(SPG5和SPG6)中的透过的非降解门冬胰岛素(峰～5828)和它的降解产物(峰～5218)。能够看出，在存在丙二醇(PG)下，更多非降解的胰岛素透过肠粘膜。
图5.在每次口服施用有或没有丙二醇的胰岛素A14GluB25HisdesB30人胰岛素(8mM)之后血糖的降低(mmol/l)。通过使用管饲法，将1.2ml/kg的剂量体积施用给SPRD大鼠。
图6.0.2mM pH 7.4的门冬胰岛素的FUV CD(实线)、在100％丙二醇(PG)中的0.2mM门冬胰岛素的FUV CD(虚线)、在从100％丙二醇(PG)稀释之后在2％PG中的0.2mM门冬胰岛素的FUV CD(虚线)。
图7.0.2mM pH 7.4的门冬胰岛素的NUV CD(实线)、在100％丙二醇(PG)中的0.2mM门冬胰岛素的NUV CD(虚线)、在从100％丙二醇(PG)稀释之后在2％PG中的0.2mM门冬胰岛素的NUV CD(虚线)。
图8.溶解在丙二醇或0.1M pH 7.5 TRIS缓冲液中的门冬胰岛素(IA)在25和40℃温育达到4周之后的纯度。门冬胰岛素粉末的靶pH是7.5。采用反相色谱法测定纯度。
图9.溶解在丙二醇或0.1M pH 7.5 TRIS缓冲液中的门冬胰岛素(IA)在25和40℃温育达到4周之后形成高分子量蛋白质(HMWP)。门冬胰岛素粉末的靶pH是7.5。采用尺寸排阻层析测定HMWP的量。
图10.溶解在丙二醇或0.1M pH 7.5 TRIS缓冲液中的门冬胰岛素(IA)在40℃温育达到4周之后硫磺素T阳性小纤维(positive fibril)的形成。门冬胰岛素粉末的靶pH是7.5。
发明概述
在本发明的一个方面，提供了药物非含水组合物，其包含脱水多肽和至少一种半极性质子有机溶剂，该多肽已经在靶pH下进行脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位。
在本发明的一个方面，提供了药物非含水组合物，其包含脱水多肽和至少一种半极性质子有机溶剂，该多肽已经在靶pH下进行脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位，并且其中所述靶pH的范围为约6.0至约9.0。
发明详述
我们已经发现，固态(脱水)多肽诸如胰岛素肽可以通过在脱水之前优化所述多肽在水溶液中的pH以非常高的程度溶解在非含水半极性质子溶剂中，使得能够制备贮存稳定的药物制剂。例如用于口服、肺部和经鼻使用的这样的药物组合物显示出高的化学和/或物理稳定性。本发明的组合物诸如口服药物组合物使用丙二醇作为半极性质子有机溶剂，也可显示出显著改善的生物利用度。
在本发明的一个方面，提供了药物非含水组合物，其包含脱水多肽和至少一种半极性质子有机溶剂，该多肽已经在靶pH下进行脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位。
在本发明的另一个方面，提供了药物非含水组合物，其包含脱水多肽和至少一种半极性质子有机溶剂，该多肽已经在靶pH下进行脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位，条件是所述多肽不是促胰岛素肽(insulinotropic peptide)、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或者毒蜥外泌肽(exendin)或其类似物或衍生物。
在本发明的进一步的方面，提供了药物非含水组合物，其包含
a)脱水的治疗活性多肽，和
b)至少一种半极性质子有机溶剂
该多肽已经在靶pH下进行脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位，并且其中所述靶pH的范围为约6.0至约9.0。
在本发明的又进一步的方面，提供了药物非含水组合物，其包含
a)脱水的治疗活性多肽，和
b)至少一种半极性质子有机溶剂
该多肽已经在靶pH下进行脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位，并且所述靶pH的范围为约6.0至约9.0，条件是所述多肽不是促胰岛素肽、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或者毒蜥外泌肽或其类似物或衍生物。
在本发明的另一个方面，药物非含水组合物包含以下的混合物
a)包含10-100个氨基酸的脱水的治疗活性多肽，和
b)至少一种半极性质子有机溶剂
该多肽已经在靶pH下脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位。在优选的实施方式中，靶pH的范围为约6.0至约9.0。
在本发明的又一个方面，药物非含水组合物包含以下的混合物
a)包含10-100个氨基酸的脱水的治疗活性多肽，和
b)至少一种半极性质子有机溶剂
该多肽已经在靶pH下脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位。在优选的实施方式中，靶pH的范围是约6.0至约9.0，条件是所述多肽不是促胰岛素肽、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或者毒蜥外泌肽或其类似物或衍生物。
如本文所使用，术语“非含水”是指组合物包含小于10％w/w的水。在更优选的实施方式中，本发明的组合物包含小于8％w/w的水，在更优选的实施方式中，小于5％w/w的水，在更加优选的实施方式中，小于3％w/w的水，而在甚至更优选的实施方式中，小于2％w/w的水。
如本文所使用，与多肽有关，术语“脱水”是指多肽已经从水溶液干燥。如本文所使用，术语“靶pH”是指当脱水多肽在纯水中再水合至大约40mg/ml或更高的浓度时将建立的含水pH。靶pH一般将与所述多肽通过干燥从其回收的含水多肽溶液的pH相等。然而，如果所述多肽溶液包含易挥发性酸或碱，则所述多肽溶液的pH不与靶pH相等。已经发现，所述多肽的pH史对于可被溶解在半极性质子有机溶剂中的多肽的量将是决定因素。
根据本发明，所述多肽已经在靶pH下脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位。因此，在本发明的一个方面，靶pH高于所述多肽的等电点超过1个pH单位。因此，在本发明的一个方面，靶pH低于所述多肽的等电点超过1个pH单位。在优选的方面，靶pH高于或低于所述多肽的pI超过1.5个pH单位。在甚至更优选的方面，靶pH高于或低于所述多肽的pI 2.0个pH单位。在进一步的方面，靶pH高于或低于所述多肽的pI 2.5个pH单位。在还进一步的方面，靶pH高于所述多肽的pI。
“挥发性碱”是指这样的碱，其在加热和/或减压下在一定程度上蒸发，例如在室温下具有高于65Pa的蒸气压的碱，或者包括在室温下具有高于65Pa的蒸气压的碱的含水共沸混合物。挥发性碱的实例是氢氧化铵、氢氧化四烃基铵、仲胺、叔胺、芳基胺、脂肪族胺或碳酸氢铵或组合。例如，挥发性碱可以是碳酸氢盐、碳酸盐、氨水、肼或有机碱诸如低碳脂肪族胺例如三甲胺、三乙胺、二乙醇胺、三乙醇胺和它们的盐。进一步，挥发性碱可以是氢氧化铵、乙胺或甲胺或它们的组合。
“挥发性酸”是指这样的酸，其在加热和/或减压下在一定程度上蒸发，例如在室温下具有高于65Pa的蒸气压的酸，或者包括在室温下具有高于65P的蒸气压的酸的含水共沸混合物。挥发性酸的实例是碳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸。
如在本文提到的，“非挥发性碱”指这样的碱，其在加热时不蒸发或仅部分蒸发，例如在室温下蒸气压低于65Pa的碱。非挥发性碱可以选自碱金属盐、碱金属氢氧化物、碱土金属盐、碱土金属氢氧化物和氨基酸或它们的组合。非挥发性碱的实例是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙和氧化钙。
如在本文提到的，“非挥发性酸”指这样的酸，其在加热时不蒸发或仅部分蒸发，例如在室温下蒸气压低于65Pa的碱。非挥发性酸的实例是盐酸、磷酸和硫酸。
如本文所使用，术语“多肽的pI”是指多肽的等电点。
如本文所使用，术语“等电点”是指其中大分子诸如肽的总净电荷是零的pH值。在肽中，可能有若干带电荷基团，并且在所述等电点，全部这些电荷的和是零。在高于等电点的pH，所述肽的总净电荷将是负值，而在低于等电点的pH值，所述肽的总净电荷将是正值。
蛋白质的pI可以通过电泳技术诸如电聚焦加以实验测定：
在抗对流介质诸如聚丙烯酰胺凝胶中建立pH梯度。当蛋白质被引入该系统时，它将在跨越凝胶施加的电场的影响之下迁移。正电荷蛋白质将迁移到阴极。最后，迁移蛋白质到达pH梯度中的一点，在那里它的净电荷是零并且被认为聚焦。这是蛋白质的等电pH(pI)。然后，将蛋白质固定在凝胶上并染色。然后，通过比较所述蛋白质在凝胶上相对于具有已知的pI值的标志分子，确定所述蛋白质的pI。
通过常规方法，本领域普通技术人员可从理论上估计蛋白质在给定pH值下的净电荷。实际上，蛋白质的净电荷等于在所述蛋白质中带电氨基酸的分数电荷(fractional charge)的和：天冬氨酸(β-羧基)、谷氨酸(δ-羧基)、半胱氨酸(硫醇基)、酪氨酸(酚基团)、组氨酸(咪唑侧链)、赖氨酸(ε-铵基)和精氨酸(胍基)。此外，也应考虑蛋白质端基的电荷(α-NH2和α-COOH)。可离子化基团的分数电荷可以由固有pKa值计算。
所述多肽的干燥即脱水可以通过任何常规干燥法进行，诸如喷雾干燥、冷冻干燥、真空干燥、开放干燥和接触干燥。在本发明的一个方面，多肽溶液被喷雾干燥，以获得低于约10％的含水量。基于如实验部分所述的干燥失重测试(重量分析)计算或通过其测量，含水量可以低于约8％、低于约6％、低于约5％、低于约4％、低于约3％、低于约2％或低于约1％。
在本发明的一个方面，多肽被喷雾干燥。在本发明的进一步的方面，多肽被冷冻干燥。
在本发明的一个方面，通过在选定的靶pH脱水预处理所述多肽获得的在有机溶剂中的溶解度至少是20mg/ml。在进一步的方面，脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度至少是30mg/ml。在进一步的方面，脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度至少是40mg/ml。在进一步的方面，脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度至少是50mg/ml。在进一步的方面，脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度至少是60mg/ml。在进一步的方面，脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度至少是70mg/ml。在进一步的方面，脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度至少是80mg/ml。在进一步的方面，脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度至少是100mg/ml。
如本文所使用，术语“半极性质子有机溶剂”是指亲水性的、水溶性的含碳溶剂，其包含O-H或N-H键或其混合。极性反映在溶剂的介电常数或偶极矩。溶剂的极性决定它能溶解的化合物的类型以及它与什么样的其它溶剂或液体化合物可混溶。一般地，极性溶剂最佳溶解极性化合物，而非极性溶剂最佳溶解非极性化合物：“相似相容”。强极性化合物如无机盐(例如氯化钠)仅仅在极性很强的溶剂中溶解。
半极性溶剂在本文定义为介电常数范围在20-50的溶剂，而极性和非极性溶剂分别由高于50和低于20的介电常数定义。半极性质子溶剂的实例列在表1中，连同水作为参照。
表1.所选定的半极性有机质子溶剂和最为参照的水的介电常数(静电介电常数)(Handbook of Chemistry and Physics，CMC Press，介电常数在静电场中或者在相对低的频率下进行测量，其中不发生驰豫)
  溶剂(开尔文温度)  介电常数，ε*
  水(293.2)丙三醇[甘油](293.2)乙二醇[乙二醇](293.2)1，3-丙二醇(293.2)甲醇(293.2)1，4-丁二醇(293.2)1，3-丁二醇(293.2)1，2-丙二醇[丙二醇](303.2)乙醇(293.2)异丙醇(293.2)  80.146.5341.435.133.031.928.827.525.320.18
在本文中，1，2-丙二醇(1，2-propanediol)和丙二醇(propylene glycol)可互换使用。在本文中，丙三醇和甘油可互换使用。在本文中，乙二醇(ethanediol)和乙二醇(ethylene glycol)可互换使用。
在本发明的一个方面，溶剂选自多元醇。如本文所使用，术语“多元醇”是指包含多个羟基基团的化合物。
在本发明的进一步的方面，溶剂选自二醇和三醇。如本文所使用，术语“二醇”是指包含两个羟基基团的化合物。如本文所使用，术语“三醇”是指包含三个羟基基团的化合物。
在本发明的进一步的方面，溶剂选自甘油(丙三醇)、乙二醇(乙二醇)、1，3-丙二醇、甲醇、1，4-丁二醇、1，3-丁二醇、丙二醇(1，2-丙二醇)、乙醇和异丙醇或它们的混合物。在本发明的进一步的方面，溶剂选自丙二醇和甘油。在本发明的优选的方面，溶剂是甘油。该溶剂在甚至高剂量下也是生物相容的并且对于胰岛素肽化合物具有高的溶剂容量。在本发明的另一个优选方面，溶剂选自丙二醇和乙二醇。这些溶剂具有低粘度、在适中的剂量下是生物相容的并且对于胰岛素肽具有很高的的溶剂容量。
所述溶剂优选应该具有高纯度，具有低含量的例如醛、酮及其他还原性杂质，以最小化溶解的多肽由于例如美拉德反应导致的化学变质。净化剂分子如甘氨酰甘氨酸和乙二胺可以被添加到到包含半极性质子有机溶剂(一种或多种)诸如多元醇的制剂，以减少多肽的变质，而抗氧化剂可以被添加来降低额外的还原性杂质的形成率。
在本发明的一个方面，所述有机溶剂以至少20％w/w的量存在于药物组合物。在本发明的进一步的方面，所述有机溶剂以至少30％w/w的量存在。在本发明的进一步的方面，所述有机溶剂以至少40％w/w的量存在。在本发明的进一步的方面，所述有机溶剂以至少50％w/w的量存在。在本发明的进一步的方面，所述有机溶剂以至少80％w/w的量存在。
为了增加所述药物组合物的贮存稳定性，已经发现所述靶pH被有利地调节至约6.0和约9.0之间。在本发明的一个方面，所述靶pH在约6.0和约9.0之间，诸如在约6.2和约8.4之间、在约6.4和约8.7之间、在约6.5和约8.5之间、在约7.0和约8.5之间或在约7.2和约8.3之间。在一个方面，所述靶pH高于约7.4、高于约7.6、高于约7.8、高于约8.0、高于约8.2、高于约8.4或高于约8.6。据认为，贮存稳定性的增加是由于所述多肽在已经如上所述进行脱水之后形成原纤维的倾向较小。
如本文所使用，术语“贮存稳定药物组合物”是指这样的药物组合物，其至少在与治疗性蛋白质有关的管理机构所要求的期间是稳定的。优选地，贮存稳定药物组合物在5℃稳定至少一年。贮存稳定性包括化学稳定性以及物理稳定性。化学不稳定性包括共价键分解，诸如水解、消旋作用、氧化或交联。利用反相色谱(RP-HPLC)和尺寸排阻色谱(SE-HPLC)，评价制剂的化学稳定性。在本发明的一个方面，在贮存期间肽相关杂质的形成小于总肽含量的10％。在本发明的进一步方面，在贮存期间肽相关杂质的形成小于5％。通常在水-乙腈或水-乙醇混合物中进行RP-HPLC分析。在一个实施方式中，在RP-HPLC步骤中的溶剂将包括盐诸如Na2SO4、(NH4)25O4、NaCl、KCl和缓冲系统诸如磷酸盐、以及柠檬酸盐和马来酸在所述溶剂中所要求的盐浓度可以是约0.1M至约1M、更优选在0.2M至0.5M之间、最优选在0.3至0.4M之间。盐浓度的增加要求有机溶剂浓度的增加，以实现在适当的时间内从柱洗脱。
物理不稳定性包括相对于天然结构的构象变化，其包括较高级别结构的丧失、聚集、原纤维形成沉淀或表面吸附。例如，已知胰岛素肽和胰岛淀粉样多肽化合物易于由于形成原纤维而不稳定。制剂的物理稳定性可以在所述制剂在不同温度储存各种时间周期之后通过诸如肉眼检查、比浊法和硫磺素T测定加以评价。
通过圆二色性和NMR可以评价构象稳定性，如Hudson和Andersen，Peptide Science，vol 76(4)，第298-308页(2004)所描述。
如本文所使用，术语“治疗活性多肽”或“治疗性多肽”是指能治疗、减轻或部分延迟给定疾病及其并发症的临床表现的多肽。
在本发明的进一步的方面，如本文所使用，术语“治疗活性多肽”或“疗性多肽”是指正被开发用于治疗用途或已经开发用于治疗用途的多肽。
足以实现这一点的量被定义为“治疗有效量”。
对于每一目的的有效量将取决于疾病或损伤的严重程度以及对象的体重和总体状况。可以理解的是，使用常规试验，通过构造数值矩阵并测试所述矩阵中的不同点，可以实现确定适当的剂量，这在受过训练的医师或兽医的普通技术范围之内。
术语“多肽”或“肽”在本文可互换地用于指由至少五个通过肽键连接的组分氨基酸组成的化合物。组分氨基酸可以来自由遗传密码编码的氨基酸并且它们可以是天然氨基酸——其不是由遗传密码编码——以及合成氨基酸。不是由遗传密码编码的天然氨基酸例如是羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、鸟氨酸、磷酸丝氨酸，D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包括通过化学合成产生的氨基酸，即由遗传密码编码的氨基酸的D-异构体，诸如D-丙氨酸和D-亮氨酸、Aib(α氨基异丁酸)、Abu(α-氨基丁酸)、Tle(叔丁基甘氨酸)、β-丙氨酸、3-氨甲基苯甲酸、邻氨基苯甲酸。
多肽和肽的产生是本领域所熟知的。多肽或肽例如可通过传统的肽合成产生，例如使用t-Boc或Fmoc化学或其它沿用已久的技术的固相肽合成，参见例如Greene和Wuts，“Protective Groups in OrganicSynthesis”，John Wiley & Sons，1999。多肽或肽也可通过这样的方法产生：其包括培养包含编码所述(多)肽的DNA序列并能够在合适的营养基质在允许所述肽表达的条件下表达所述(多)肽的宿主细胞。对于包含非天然氨基酸残基的(多)肽，重组细胞应该被改变，使得非天然氨基酸被并入(多)肽，例如使用tRNA突变体。
如本文所使用，术语“药物组合物”是指这样的产品，其包含治疗活性多肽，连同药物赋形剂，诸如表面活性剂、缓冲液、防腐剂和张力调节剂(tonicity modifier)，所述药物组合物可用于通过给人施用所述药物组合物来治疗、预防或降低疾病或紊乱的严重程度。因此，药物组合物在本领域中也被称为药物制剂。可理解的是，将被重构的药物组合物的pH是在室温下对通过重构在规定重构液体而产生的重构组合物进行测量的pH值。
如本文所使用，术语“药物可接受的”是指适于正常药物应用，即不在患者中引起严重的不利事件等。
如本文所使用，术语“缓冲剂”是指在药物组合物中的化合物，其降低所述组合物的pH随时间改变的倾向，否则所述组合物的pH随时间改变将由于化学反应而发生。缓冲剂包括化学制品诸如磷酸钠、TRIS、甘氨酸和柠檬酸钠。
如本文所使用，术语“防腐剂”是指被添加至药物组合物以防止或延迟微生物活性(生长和代谢)的化合物。药学上可接受的防腐剂的实例是苯酚、间甲酚、和苯酚与间甲酚的混合物。
如本文所使用，术语“稳定剂”是指被加到含肽药物组合物以使所述肽稳定即增加这样的组合物的贮存期限和/或使用时间的化学制品。用于药物制剂的稳定剂的实例是L-甘氨酸、L-组氨酸、精氨酸、甘氨酰甘氨酸、乙二胺、柠檬酸盐、EDTA、聚乙二醇、羧甲基纤维素和表面活性剂和抗氧化剂如α-生育酚和L-抗坏血酸。
如本文所使用，术语“表面活性剂”是指任何物质，特别是去污剂，其可以吸附在表面和界面上，如液体与空气之间、液体与液体之间、液体与容器之间或液体与任何固体之间。表面活性剂可选自去污剂，例如乙氧基化蓖麻油、聚乙二醇化(polyglycolyzed)甘油酯、乙酰化单酸甘油酯、山梨聚糖(sorbitan)脂肪酸酯、聚山梨酸酯诸如聚山梨酸酯-20、泊洛沙姆诸如泊洛沙姆188和泊洛沙姆407、聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧化乙烯衍生物诸如烷基化和烷氧基化衍生物(Tween，例如Tween-200或Tween-80)、单酸甘油酯或其乙氧基化衍生物、甘油二酯或其聚氧化乙烯衍生物、甘油、胆酸或其衍生物、卵磷脂、醇和磷脂、甘油磷酸脂(卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸)、甘油糖脂(吡喃型半乳糖苷)、鞘磷脂(鞘磷脂)和鞘糖脂(神经酰胺、神经节苷脂)、DSS(多库酯(docusate)钠，CAS登记号[577-11-7]；多库酯钙，CAS登记号[128-49-4]；多库酯钾，CAS登记号[7491-09-0])、SDS(十二烷基硫酸钠或月桂基硫酸钠)、二棕榈酰磷脂酸、辛酸钠、胆汁酸及其盐和甘氨酸或牛磺酸缀合物、熊去氧胆酸、胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、甘胆酸钠、正十六烷基-N，N-二甲基-3-铵基-1-丙磺酸盐、阴离子(烷基-芳基-磺酸盐)一价表面活性剂、十六酰溶血磷脂酰-L-丝氨酸、溶血磷脂(例如乙醇胺、胆碱、丝氨酸或苏氨酸的1-酰基-sn-甘油-3-磷酸酯)、溶血磷脂酰和磷脂酰胆碱的烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)-衍生物，例如溶血卵磷脂的月桂酰和十四酰衍生物、二棕榈酰磷脂酰胆碱、和极性头基的修饰，即胆碱、乙醇胺、磷脂酸、丝氨酸、苏氨酸、甘油、肌醇和带正电DODAC、DOTMA、DCP、BISHOP、溶血磷脂酰丝氨酸和溶血磷脂酰苏氨酸、两性离子表面活性剂(例如N-烷基-N，N-二甲基铵基-1-丙磺酸盐、3-乙醇胺基-1-丙基二甲基铵基-1-丙磺酸盐、十二酰膦酸胆碱、十四酰溶血卵磷脂、鸡蛋溶血卵磷脂)、阳离子表面活性剂(季铵碱)(例如鲸蜡基-三甲基溴化铵、西吡氯铵(氯化十六烷吡啶))、非离子型表面活性剂(例如，烷基糖苷如十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷、十二烷基β-D-麦芽糖苷、十四烷基β-D-吡喃葡萄糖苷、癸基β-D-麦芽糖苷、十二烷基β-D-麦芽糖苷、十四烷基β-D-麦芽糖苷、十六烷基β-D-麦芽糖苷、癸基β-D-麦芽三糖苷、十二烷基β-D-麦芽三糖苷、十四烷基β-D-麦芽三糖苷、十六烷基β-D-麦芽三糖苷、正十二烷基-蔗糖、正癸基蔗糖、脂肪醇乙氧基化物(例如聚氧乙烯烷基醚如辛二醇单十三醚(octaethylene glycol mono tridecyl ether)、辛二醇单十二醚、辛二醇单十四醚)、嵌段共聚物如聚环氧乙烷/聚环氧丙烷嵌段共聚物(Pluronics/Tetronics、Triton X-100)、乙氧基化山梨聚糖烷酸酯(ethoxylated sorbitan alkanoates)表面活性剂(例如Tween-40、Tween-80、Brij-35)、夫西地酸衍生物(例如sodium tauro-dihydrofusidate等)、长链脂肪酸和其盐、C6-C12(例如油酸和辛酸)、酰基肉毒碱和衍生物、赖氨酸、精氨酸或组氨酸的的Nα-酰化衍生物、或赖氨酸或精氨酸的侧链酰化衍生物、包含赖氨酸、精氨酸或组氨酸和中性或酸性氨基酸的任何组合的二肽的Nα-酰化衍生物、包含中性氨基酸和双电荷氨基酸的任何组合的三肽的Nα-酰化衍生物，或者所述表面活性剂可以选自咪唑啉衍生物或其混合物。
如本文所使用，术语“疾病的治疗”是指已发展所述疾病、病症或紊乱的患者的控制和护理。治疗的目的是抗击所述疾病、病症或紊乱。治疗包括施用所述活性化合物以消除或控制所述疾病、病症或紊乱以及减轻与所述疾病、病症或紊乱有关的症状或并发症，和预防所述疾病、病症或紊乱。
如本文所使用，术语“疾病的预防”定义为在所述疾病临床发作之前控制和护理处于发展所述疾病的风险中的个体。预防的目的是抗击所述疾病、病症或紊乱的发展，并包括施用所述活性化合物以防止或延迟所述症状或并发症的发作和防止或延迟相关疾病、病症或紊乱的发展。
如本文所使用，提及肽，术语“类似物”是指经修饰的肽，其中所述肽的一个或多个氨基酸残基已经由其它氨基酸残基置换和/或其中一个或多个氨基酸残基已经从所述肽缺失，和/或其中一个或多个氨基酸残基已经被添加到所述肽。这样的氨基酸残基添加或缺失可以在所述肽的N-末端和/或所述肽的C-末端发生。在一个实施方式中，类似物相对于天然肽包含低于6个的修饰(置换、缺失、添加)。在一个实施方式中，类似物相对于天然肽包含低于5个的修饰(置换、缺失、添加)。在一个实施方式中，类似物相对于天然肽包含低于4个的修饰(置换、缺失、添加)。在一个实施方式中，类似物相对于天然肽包含低于3个的修饰(置换、缺失、添加)。在一个实施方式中，类似物相对于天然肽包含低于2个的修饰(置换、缺失、添加)。在一个实施方式中，类似物相对于天然肽仅仅包含一个修饰(置换、缺失、添加)。所添加和/或交换的氨基酸残基可以是可编码的氨基酸残基或其它天然存在的残基或完全合成的氨基酸残基。
如本文所使用，与亲本肽有关，术语“衍生物”是指化学上修饰的亲本(parent)蛋白质或其类似物，其中至少一种取代基在所述亲本蛋白质或其类似物中不存在，即已经进行共价修饰的亲本蛋白质。通常的修饰是酰胺、糖、烷基、酰基、酯、PEG化等。
如本文所使用，术语“GLP-1化合物”是指GLP-1(7-37)(SEQ ID NO.1)、其促胰岛素类似物和其促胰岛素衍生物。
如本文所使用，提及肽或化合物，术语“促胰岛素”是指响应血浆葡萄糖水平增加而刺激胰岛素分泌的能力。促胰岛素肽和化合物是GLP-1受体的激动剂。化合物的促胰岛素性质可以通过本领域已知的体外或体内测定加以确定。
如本文所使用，术语“毒蜥外泌肽-4化合物”定义为毒蜥外泌肽-4(1-39)(SEQ ID NO.2)、其促胰岛素片段、其促胰岛素类似物和其促胰岛素衍生物。
如本文所使用，“胰岛素肽”是指在CysA7和CysB7之间和在CysA20和CysB19之间具有二硫桥以及在CysA6和CysA11之间具有内部二硫桥的人胰岛素、猪胰岛素或牛胰岛素或者其胰岛素类似物或衍生物。
如本文所使用，胰岛素类似物是具有这样的分子结构的多肽，所述分子结构通过缺失和/或置换在天然胰岛素中存在的至少一种氨基酸残基和/或通过添加至少一种氨基酸残基，在形式上可起源于天然存在的胰岛素的结构，例如人胰岛素的结构。
在一个方面中，根据本发明的胰岛素类似物相对于亲本胰岛素包含低于8个的修饰(置换、缺失、添加)。在一个方面中，胰岛素类似物相对于亲本胰岛素包含低于7个的修饰(置换、缺失、添加)。在一个方面中，胰岛素类似物相对于亲本胰岛素包含低于6个的修饰(置换、缺失、添加)。在另一个方面中，胰岛素类似物相对于亲本胰岛素包含低于5个的修饰(置换、缺失、添加)。在另一个方面中，胰岛素类似物相对于亲本胰岛素包含低于4个的修饰(置换、缺失、添加)。在另一个方面中，胰岛素类似物相对于亲本胰岛素包含低于3个的修饰(置换、缺失、添加)。在另一个方面中，胰岛素类似物相对于亲本胰岛素包含低于2个的修饰(置换、缺失、添加)。
胰岛素类似物可以使得例如快速开始作用、延长作用和/或对蛋白酶的稳定性得以获得。
在一个方面，所述胰岛素类似物使得快速开始作用得以获得，即，胰岛素类似物的作用在施用后4小时内、可选地3小时、2小时、1小时或1/2小时内开始。在另一个方面，所述胰岛素类似物使得延长作用得以获得，即，胰岛素类似物的作用在施用后持续超过4小时、可选地6小时、8小时、12小时、18小时或24小时。
所述胰岛素类似物可以使得其中B链的位置28可从天然Pro残基被改变为Asp、Lys、Leu、Val、Ala或Ile之一。在另一个方面，胰岛素的位置B29的Lys被改变为Pro或Glu。在一个方面，根据本发明的胰岛素类似物使得其中胰岛素的位置B28氨基酸残基是Pro、Asp、Lys、Leu、Val或Ala，而位置B29的氨基酸残基是Lys或Pro，并且任选地位置B30的氨基酸残基被缺失。此外，位置A21的Asn可以被改变为Ala、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val，尤其是改变为Gly、Ala、Ser或Thr，并优选改变为Gly。而且，位置B3的Asn可被改变为Lys、Thr、Ser、Gln、Glu或Asp。胰岛素类似物的进一步实例是des(B30)人胰岛素；des(B30)人胰岛素类似物；其中PheB1已经缺失的胰岛素类似物；其中A链和/或B链具有N-末端延伸的胰岛素类似物；和其中A链和/或B链具有C-末端延伸的胰岛素类似物。因此，一个或两个Arg可以被添加到位置B1。在另一个方面，根据本发明的胰岛素类似物是des(B28-B30)人胰岛素、des(B27)人胰岛素或des(B30)人胰岛素。在又一个方面，根据本发明的胰岛素类似物是其中位置B3的氨基酸残基是Lys并且位置B29的氨基酸残基是Glu或Asp的胰岛素类似物。
在另一个方面，根据本发明的胰岛素类似物是des(B28-B30)人胰岛素、des(B27)人胰岛素或des(B30)人胰岛素。在又一个方面，根据本发明的胰岛素类似物是其中位置B3的氨基酸残基是Lys并且位置B29的氨基酸残基是Glu或Asp的胰岛素类似物。
根据本发明的胰岛素类似物可以是蛋白水解稳定的胰岛素类似物，即防止蛋白酶降解。蛋白水解稳定的胰岛素类似物的非限制实例描述在WO 2008/034881(Novo Nordisk)。
在一个方面，根据本发明的胰岛素类似物可以是蛋白水解稳定的胰岛素类似物。
如本文所使用，蛋白水解稳定的胰岛素类似物”是指这样的胰岛素类似物，其相对于人胰岛素包含一个或多个突变，即一个或多个置换、添加、插入和/或缺失，并且其相对于人胰岛素经受一种或多种蛋白酶的较慢降解。在本发明的一个方面，根据本发明的胰岛素类似物对于一种或多种选自下列的酶的降解是稳定的：胃蛋白酶(例如同工型胃蛋白酶A、胃蛋白酶B、胃蛋白酶C和/或胃蛋白酶F)、胰凝乳蛋白酶(例如同工型胰凝乳蛋白酶A、胰凝乳蛋白酶B和/或胰凝乳蛋白酶C)、胰蛋白酶、胰岛素降解酶(IDE)、弹性蛋白酶(例如同工型胰弹性蛋白酶I和/或II)、羧肽酶(例如同工型羧基肽酶A、羧肽酶A2和/或羧肽酶B)、氨肽酶组织蛋白酶D及其他存在于源自大鼠猪或人的肠提取物的酶。
在本发明的一个方面，蛋白水解稳定的胰岛素类似物是胰岛素类似物，其中位置A14的氨基酸是Glu或His、位置B25的氨基酸是His并且其任选地进一步包含一种或多种其他突变；胰岛素类似物，其中
·位置A8的氨基酸是His，和/或位置A12的氨基酸是Glu或Asp，和/或位置A13的氨基酸是His、Asn、Glu或Asp，和/或位置A14的氨基酸是Asn、Gln、Glu、Arg、Asp、Gly或His，和/或位置A15的氨基酸是Glu或Asp；和
·位置B1的氨基酸是Glu，和/或位置B16的氨基酸是Glu或His，和/或位置B25的氨基酸是His，和/或位置B26的氨基酸是His、Gly、Asp或Thr，和/或位置B27的氨基酸是His、Glu、Lys、Gly或Arg，和/或位置B28的氨基酸是His、Gly或Asp；和
其任选地进一步包含一种或多种其他的突变；或
胰岛素类似物，其中位置A14的氨基酸选自Lys、Glu、Arg、Asp、Pro和His；并且所述胰岛素类似物的B链相对于所述亲本胰岛素包含至少两个突变，其中两个或更多个突变具有这样的形式——位置B27、B28、B29和B30的氨基酸缺失，或者在位置B30的氨基酸缺失和选自以下氨基酸置换的组合：在位置B25氨基酸置换为His，在位置B26氨基酸置换为Gly或Glu，在位置B27氨基酸置换为Gly或Lys和在位置B28氨基酸置换为Asp、His、Gly、Lys或Glu。
在又进一步的方面，本发明的胰岛素选自：人胰岛素；DesB30人胰岛素；AspB28人胰岛素；AspB28，DesB30人胰岛素；LysB3，GluB29人胰岛素；LysB28，ProB29人胰岛素；GluA14，HisB25人胰岛素；HisA14，HisB25人胰岛素；GluA14，HisB25，DesB30人胰岛素；HisA14，HisB25，DesB30人胰岛素；GluA14，HisB25，desB27，desB28，desB29，desB30人胰岛素；GluA14，HisB25，GluB27，desB30人胰岛素；GluA14，HisB16，HisB25，desB30人胰岛素；HisA14，HisB16，HisB25，desB30人胰岛素；HisA8，GluA14，HisB25，GluB27，desB30人胰岛素；HisA8，GluA14，GluB1，GluB16，HisB25，GluB27，desB30人胰岛素；和HisA8，GluA14，GluB16，HisB25，desB30人胰岛素。
“desB30胰岛素”、“desB30人胰岛素”是指缺乏B30氨基酸残基的胰岛素或其类似物。
“亲本胰岛素”是指天然存在的胰岛素，例如人胰岛素或猪胰岛素。可选地，亲本胰岛素可以是胰岛素类似物。
在本发明的一个方面，治疗活性多肽是胰岛素肽。
在本发明的一个方面，胰岛素肽是人、人胰岛素的类似物、人胰岛素的衍生物或人胰岛素类似物的衍生物。
在本发明的一个方面，胰岛素肽是人胰岛素。
在本发明的一个方面，胰岛素肽是胰岛素衍生物。在本发明的进一步的方面，胰岛素衍生物选自B29-Nε-肉豆蔻酰-des(B30)人胰岛素、B29-Nε-棕榈酰-des(B30)人胰岛素、B29-Nε-肉豆蔻酰人胰岛素、B29-Nε-棕榈酰人胰岛素、B28-Nε-肉豆蔻酰LysB28 ProB29人胰岛素、B28-Nε-棕榈酰LysB28 ProB29人胰岛素、B30-Nε-肉豆蔻酰-ThrB29 LysB30人胰岛素、B30-Nε-棕榈酰-ThrB29 LysB30人胰岛素、B29-Nε-(N-棕榈酰-γ-谷氨酰)-des(B30)人胰岛素、B29-Nε-(N-lithocholyl-γ-谷氨酰)-des(B30)人胰岛素、B29-Nε-(ω-羧基十七烷酰)-des(B30)人胰岛素和B29-Nε-(ω-羧基十七烷酰)人胰岛素。
在本发明的另一个方面，胰岛素衍生物是B29-Nε-肉豆蔻酰-des(B30)人胰岛素。
在本发明的一个方面，胰岛素肽是酸稳定胰岛素。
酸稳定胰岛素可以选自具有下列氨基酸残基置换之一的人胰岛素的类似物：
A21G
A21G、B28K、B29P
A21G、B28D
A21G、B28E
A21G、B3K、B29E
A21G、desB27
A21G、B9E
A21G、B9D
A21G、B10E。
在本发明的进一步的方面，，胰岛素肽是胰岛素类似物。胰岛素类似物可选自：类似物，其中位置B28是Asp、Lys、Leu Val或Ala，而位置B29是Lys或Pro；和des(B28-B30)、des(B27)或des(B30)人胰岛素。
在本发明的另一个方面，胰岛素类似物是人胰岛素的类似物，其中位置B28是Asp或Lys，并且位置B29是Lys或Pro。
在本发明的另一个方面，胰岛素类似物是des(B30)人胰岛素。
在本发明的另一个方面，胰岛素类似物是其中位置B28是Asp的人胰岛素类似物。
在本发明的另一个方面，胰岛素类似物是其中位置B3是Lys并且位置B29是Glu或Asp的人胰岛素类似物。
在本发明的另一个方面，胰岛素类似物和衍生物选自以下公开的那些：EP 0 792 290(Novo Nordisk A/S)、EP 0 214 826和EP 0 705 275(NovoNordisk A/S)、US 5,504,188(Eli Lilly)、EP 0 368 187(Aventis)、US专利5,750,497和6,011,007、EP 375437和EP 383472，并且其中这类胰岛素可包括但不限于谷赖胰岛素(也称为
Figure A20088001759900191
其与人胰岛素的不同在于位置B3的氨基酸天冬酰胺被赖氨酸取代，而位置B29的赖氨酸被谷氨酸代替)、LysB28 ProB29人胰岛素
Figure A20088001759900192
和AspB28人胰岛素(门冬胰岛素)。
在本发明的一个方面，所述人胰岛素肽类似物是AspB28人胰岛素。在本发明的另一个方面，所述人胰岛素肽类似物是LysB28，ProB29人胰岛素。在本发明的另一个方面，所述人胰岛素肽类似物是LysB3，GluB29人胰岛素(谷赖胰岛素)。在本发明的另一个方面，所述人胰岛素类似物是des(B30)人胰岛素。
此外，前体或中间体的衍生物被本发明涵盖。这样的衍生物的实例是单链胰岛素，其包含人胰岛素或类似物的B链和A链或者由连接肽连接的其类似物或衍生物。
根据本发明的胰岛素衍生物是天然存在的胰岛素或已经例如通过在所述胰岛素主链的一个或多个位置中引入侧链或通过氧化或还原在所述胰岛素中氨基酸残基的基团或通过将游离羧基转化成酯基或酰胺基而进行了化学修饰的胰岛素类似物。其它衍生物通过酰化游离氨基或羟基而获得，例如酰化在人胰岛素或desB30人胰岛素的B29位置中的游离氨基或羟基。酰化多肽的非限制实例可以例如在WO 95/07931中找到，其通过引用由此并入。
在本发明的一个方面，治疗活性多肽具有小于100kDa、小于50kDa或小于10kDa的摩尔重量。
在本发明的一个方面，治疗活性多肽具有小于100kDa、小于50kDa或小于10kDa的摩尔重量，条件是所述多肽不是促胰岛素肽、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或毒蜥外泌肽或其类似物或衍生物。
在本发明的另一个方面，治疗活性多肽包含100个以下的氨基酸或90个以下的氨基酸、或60个以下的氨基酸。在本发明的另一个方面，治疗活性多肽包含至少10个氨基酸、至少15个氨基酸、或至少20个氨基酸。在本发明的进一步的方面，治疗活性多肽包含10-100个氨基酸，在进一步的方面，包含15-90个氨基酸，在进一步的方面，包含20-80个氨基酸，在进一步的方面，包含25-70个氨基酸，在又进一步的方面，包含25-65个氨基酸，在仍进一步的方面，包含25-60个氨基酸或25-55个氨基酸。在进一步的方面，治疗活性多肽包含30-70个氨基酸、30-65个氨基酸、30-60个氨基酸或30-55个氨基酸。
在本发明的另一个方面，治疗活性多肽包含低于100个的氨基酸或低于90个的氨基酸、或低于60个的氨基酸。在本发明的另一个方面，治疗活性多肽包含至少10个氨基酸、至少15个氨基酸、或至少20个氨基酸。在本发明的进一步的方面，治疗活性多肽包含10-100个氨基酸，在进一步的方面，包含15-90个氨基酸，在进一步的方面，包含20-80个氨基酸，在进一步的方面，包含25-70个氨基酸，在又进一步的方面，包含25-65个氨基酸，在仍进一步的方面，包含25-60个氨基酸或25-55个氨基酸。在进一步的方面，治疗活性多肽包含30-70个氨基酸、30-65个氨基酸、30-60个氨基酸或30-55个氨基酸，条件是所述多肽不是促胰岛素肽、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或者毒蜥外泌肽或其类似物或衍生物。
在本发明的一个方面，治疗活性多肽是水溶性的多肽。在另一个方面，治疗活性多肽在25℃在至少100μg多肽每ml溶液的浓度下是水溶性的。在又一个方面，治疗活性多肽在距所述多肽在水溶液中的等电点至少2个pH单位的pH值下是水溶性的。因此，在本发明的一个方面，所述多肽在高于所述多肽的等电点超过2个pH单位的pH值下是水溶性的。在本发明的另一个方面，所述多肽在低于所述多肽的等电点超过2个pH单位的pH值下是水溶性的。在进一步的方面，所述多肽在高于或低于所述多肽的pI 2.5个pH单位的pH值下是水溶性的。在仍进一步的方面，所述多肽在高于或低于所述多肽的pI 3.0个pH单位的pH值下是水溶性的。在进一步的方面，所述多肽在高于或低于所述多肽的pI 3.5个pH单位的pH值下是水溶性的。
在本发明的一个方面，治疗活性多肽是根据任何上述方面是水溶性的多肽，条件是所述多肽不是促胰岛素肽、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或者毒蜥外泌肽或其类似物或衍生物。
“溶性的”是指大浓度多肽，例如100μg多肽每ml溶液，在25℃溶于水溶液或缓冲溶液。确定包含于溶液的多肽是否溶解的方法是本领域已知的。
在一个实施方式中，所述溶液可经受30,000g离心20分钟，然后可通过RP-HPLC测定上清液的多肽浓度。如果该浓度在实验误差范围内与原来用于制备所述组合物的多肽浓度相等，则所述多肽完全可溶于本发明的组合物。
在另一个实施方式中，所述多肽在本发明的组合物中的溶解度可以通过肉眼观察包含所述组合物的容器加以简单测定。如果所述溶液看起来是澄清的并且没有颗粒物质悬浮或者沉淀在所述容器的侧面/底部，则所述多肽是可溶的。
本领域技术人员已知的是，例如环孢霉素不是水溶性的。
在本发明的一方面，治疗活性多肽选自单链胰岛素(例如描述于WO2005/054291)、胰岛素模拟物(例如描述在WO 2006/018450)、结合MC4受体的多肽、人生长激素或其类似物、凝血因子VII或其类似物、甲状旁腺激素或其类似物、人促卵泡激素或其类似物、生长因子例如血小板衍生生长因子(PDGF)、Obestatin、转化生长因于α(TGF-α)、转化生长因于β(TGF-β)、表皮生长因子(EGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、生长调节素例如胰岛素生长因子I(IGF-I)、胰岛素生长因素II(IFG-II)、红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)或血管生成素、干扰素、尿激酶原、尿激酶、组织纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂1、纤溶酶原激活物抑制剂2、von Willebrandt因子、细胞因子例如白介素例如白介素(IL)1、IL-1Ra、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-20或IL-21，集落刺激因子(CFS)例如GM-CSF、干细胞因子、肿瘤坏死因子例如TNF-α、淋巴毒素-α、淋巴毒素-β、CD40L或CD30L，蛋白酶抑制剂例如抑肽酶，酶例如过氧化物歧化酶、天冬酰胺酶、精氨酸酶、精氨酸脱氨酶、腺苷脱氨酶、核糖核酸酶、过氧化氢酶、尿酸酶、胆红素氧化酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性磷酸酶、β-葡萄糖苷酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶、巴曲酶，阿片样物质例如内啡肽、脑啡肽或非天然阿片样物质，激素或神经肽例如降钙素、胰高血糖素、胃泌素促肾上腺皮质激素(ACTH)、缩胆囊肽、黄体生成素、促性腺激素释放素、绒毛膜促性腺激素、促肾上腺皮质激素释放因子、加压素、催产素、抗利尿激素、促甲状腺素、促甲状腺激素释放素、松弛素、催乳素、肽YY、神经肽Y、胰多肽、瘦素、CART(可卡因-苯丙胺调节转录肽)、CART相关肽、脂滴包被蛋白(perilipin)、作用于黑皮质素受体的肽类激素例如α-MSH或ACTH、黑色素浓缩激素、钠尿肽、肾上腺髓素内皮缩血管肽、分泌素、胰岛淀粉样多肽、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸环化酶活化多肽(PACAP)、铃蟾肽、铃蟾肽样肽、胸腺素、肝素结合蛋白、可溶性CD4、下丘脑释放因子、褪黑激素(melanotonins)和其类似物。
基于构象稳定性蛋白质的药物对于保持生物活性和最小化由于变性作用和原纤化作用而导致的不可逆损失是重要的。特别是大多肽和蛋白质对于由于复杂的再折叠模式导致的构象变化方面是易变的。此外，具有已知的原纤维形成史的多肽，例如胰岛素和胰岛淀粉样多肽，对于三级结构的去稳定(即熔球态的形成)是敏感的。
对于每一目的的有效量将取决于疾病或损伤的严重程度以及对象的体重和总体状况。
在本发明的一个方面，所述药物制剂包含浓度从0.1％w/w至50％w/w的治疗活性多肽。
对于每一目的的有效量将取决于疾病或损伤的严重程度以及对象的体重和总体状况。
如本文所使用，术语“约”是指在所描述的数值的合理范围，例如正或负10％。
本发明进一步提供如下制备药物溶液的方法：
a)提供治疗活性多肽的水溶液，任选包含赋形剂，
b)调节pH值至靶pH值，该靶pH值高于或低于所述多肽的pI 1个单位、优选2个单位和更优选2.5个pH单位，
c)通过常规干燥技术例如冷冻和喷雾干燥除去水(脱水)，和
d)在半极性质子非水溶剂中例如通过搅拌、翻转或其它混合法混合和溶解所述多肽，
e)任选地过滤或离心所述非含水多肽溶液以除去未溶解的无机盐，
f)任选地通过例如添加固体干燥剂或真空干燥除去剩余量的水，
g)任选地，对于溶液加压计量吸入剂进一步添加赋形剂例如氢氟烷推进剂和助溶剂，或者对于口服剂型添加去污剂、聚合物、脂质和助溶剂。
本发明进一步提供如下制备药物溶液的方法：
a)提供治疗活性多肽的水溶液，任选包含赋形剂，
b)调节pH值至靶pH值，该靶pH值高于或低于所述多肽的pI 1个单位、优选2个单位和更优选2.5个pH单位，
c)通过常规干燥技术例如冷冻和喷雾干燥除去水(脱水)，和
d)在半极性质子非水溶剂中例如通过搅拌、翻转或其它混合法混合和溶解所述多肽，
e)任选地过滤或离心所述非含水多肽溶液以除去未溶解的无机盐，
f)任选地通过例如添加固体干燥剂或真空干燥除去剩余量的水，
g)任选地，对于溶液加压计量吸入剂进一步添加赋形剂例如氢氟烷推进剂和助溶剂，或者对于口服剂型添加去污剂、聚合物、脂质和助溶剂，
条件是所述多肽不是促胰岛素肽、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或者毒蜥外泌肽或其类似物或衍生物。
本发明进一步提供如下制备药物组合物的方法：
a)提供治疗活性多肽的水溶液，任选地包含稳定剂例如锌和甘氨酰甘氨酸，
b)调节pH值至高于或低于所述多肽的pI 1个单位、优选2个单位和更优选2.5个pH单位，例如通过添加非挥发性碱或酸例如盐酸或氢氧化钠至所述溶液，
c)通过常规干燥技术例如冷冻和喷雾干燥除去水(脱水)，
d)在半极性质子非水溶剂中例如通过搅拌、翻转或其它混合法混合和溶解所述多肽，
e)任选地过滤或离心所述非含水多肽溶液以除去未溶解的无机盐，
f)任选地通过例如添加固体干燥剂或真空干燥除去剩余量的水，
g)任选地，对于溶液加压计量吸入剂进一步添加赋形剂例如氢氟烷推进剂和助溶剂，或者对于口服剂型添加去污剂、聚合物、脂质和助溶剂。
本发明进一步提供如下制备药物组合物的方法：
a)提供治疗活性多肽的水溶液，任选地包含稳定剂例如锌和甘氨酰甘氨酸，
b)调节pH值至高于或低于所述多肽的pI 1个单位、优选2个单位和更优选2.5个pH单位，例如通过添加非挥发性碱或酸例如盐酸或氢氧化钠至所述溶液，
c)通过常规干燥技术例如冷冻和喷雾干燥除去水(脱水)，
d)在半极性质子非水溶剂中例如通过搅拌、翻转或其它混合法混合和溶解所述多肽，
e)任选地过滤或离心所述非含水多肽溶液以除去未溶解的无机盐，
f)任选地通过例如添加固体干燥剂或真空干燥除去剩余量的水，
g)任选地，对于溶液加压计量吸入剂进一步添加赋形剂例如氢氟烷推进剂和助溶剂，或者对于口服剂型添加去污剂、聚合物、脂质和助溶剂，
条件是所述多肽不是促胰岛素肽、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或者毒蜥外泌肽或其类似物或衍生物。
在本发明的一个方面，所述多肽被添加至水溶液。所述水溶液可以是纯水或者它可以包含赋形剂或碱性溶液。
在本发明的一个方面，所述多肽溶液的pH用碱性溶液包括非挥发性碱调节。非挥发性碱可以选自碱金属盐、碱金属氢氧化物、碱土金属盐、碱土金属氢氧化物和氨基酸或它们的组合。例如，pH可以用氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氧化钙或其任何组合调节。在本发明的另一个方面，所述多肽溶液的pH用选自盐酸、磷酸和硫酸的非挥发性酸调节。
在本发明的一个方面，所述多肽非水溶液包含甘氨酰甘氨酸。甘氨酰甘氨酸可能作为溶剂中还原性杂质例如甘油醛的清除剂。在一个方面，甘氨酰甘氨酸被添加至包含胰岛素的丙二醇溶液，例如以甘氨酰甘氨酸在所述溶液中约4mM和约200mM之间的浓度添加。
在本发明的一个方面，所述多肽非水溶液包含Tween 80和油酸。当Tween 80和油酸被添加至非含水多肽溶液时，所述多肽溶液在用符合口服的含水液体稀释后形成微乳剂。所述微乳剂可能作为吸收增强剂，而且产生更可再现的吸收动力学。在所述溶液中Tween 80的浓度将例如在约30和70％w/w之间，而油酸的浓度将例如在10和30％w/w之间。
在一个方面，本发明涉及用于治疗I型糖尿病、II型糖尿病及其他引起需要这样的治疗的患者高血糖的状态的药物组合物。
在一个方面，本发明涉及本发明的具有药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂的药物组合物，该组合物可以被提供用于治疗I型糖尿病、II型糖尿病及其他引起需要这样的治疗的患者高血糖的状态的药物组合物。
在本发明的一个方面，提供用于治疗I型糖尿病、II型糖尿病及其他引起需要这样的治疗的患者高血糖的状态的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的本发明的药物组合物。
在本发明的一个方面，提供用于治疗I型糖尿病、II型糖尿病及其他引起需要这样的治疗的患者高血糖的状态的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的本发明的药物组合物、任选地连同药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂。
在本发明的一个方面，提供制备本发明的药物组合物的方法，所述药物组合物用于治疗I型糖尿病、II型糖尿病及其他引起高血糖的状态。
在本发明的一个方面，提供制备药物组合物的方法，所述药物组合物用于治疗I型糖尿病、II型糖尿病及其他引起高血糖的状态。
药物组合物
根据本发明的组合物可以例如经皮下、口服、经鼻或经肺部施用。
对于皮下施用，根据本发明的组合物与已知的治疗活性多肽的制剂类似地进行配制。而且，对于皮下施用，根据本发明的组合物与已知的治疗活性多肽的施用类似地进行施用，并且通常医师熟悉该方法。
在本发明的一个方面——其中治疗活性肽是胰岛素肽，本发明的组合物可以通过吸入以剂量有效的方式施用，以增加循环胰岛素肽水平和/或降低循环葡萄糖水平。这样的施用对于治疗紊乱例如糖尿病或高血糖可以是有效的。实现例如胰岛素有效剂量要求施用施用包含超过约0.5μg/kg至约50μg/kg胰岛素的本发明的组合物的吸入剂量。治疗有效量可以通过本领域技术人员加以确定，其将考虑包括胰岛素水平、血糖水平、患者身体条件、患者肺部状态等等在内的因素。
本发明的组合物可以通过吸入递送，以实现治疗活性多肽例如胰岛素的快速吸收。通过吸入施用可以引起与皮下施用胰岛素相当的药代动力学。其中治疗性多肽是胰岛素肽的本发明的组合物的吸入导致循环胰岛素的快速增加，之后是血糖水平的快速下降。当比较相似的粒度和相似的肺沉积水平时，不同的吸入装置一般提供相似的药代动力学。
根据本发明，组合物可以通过各种本领域已知用于通过吸入施用治疗剂例如胰岛素肽的吸入装置的任何一种加以递送。这些装置包括计量吸入器、雾化器、干燥粉未发生器等。本发明的组合物一方面通过加压计量吸入剂或喷雾器进行递送。用于施用本发明的组合物的吸入装置存在若干期望的特征。例如，通过吸入装置递送有利地是可靠的、可再现的和精确的。吸入装置应该递送小颗粒例如小于约10μm例如约1-5μm的颗粒，以良好地适合呼吸。适于本发明的实践的市售吸入装置的一些具体实例是TurbohalerTM(Astra)、(Glaxo)、
Figure A20088001759900262
(Glaxo)、SpirosTM吸入器(Dura)、由Nektar、3M Drug Delivery Systems和Bespak推向市场的装置、AERxTM(Aradigm)、
Figure A20088001759900263
雾化器(Mallinckrodt)、Acorn
Figure A20088001759900264
雾化器(Marquest Medical Products)、
Figure A20088001759900265
计量吸入器(Glaxo)、
Figure A20088001759900266
粉末吸入器(Fisons)等。
加压计量吸入器(pMDI)是广为人知的用于通过吸入向呼吸道施用药剂的装置。pMDI包括耐压气溶胶筒，其一般装满产品诸如溶于液化推进剂的药物(溶液制剂)或悬浮在液化推进剂中的微粒化颗粒(悬浮制剂)，其中容器备有计量阀。溶液制剂提供活性成分和赋形剂完全溶于推进剂载体或它与适当的助溶剂诸如的乙醇的混合物中的活性成分和赋形剂均一这一优点。溶液制剂还避免了与悬浮制剂有关的物理稳定性问题，如此确保更一致的统一剂量施用。
氢氟烷特别是1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3-六氟丙烷(HFA 227)和它们的混合物已经确认是非CFC推进剂的最佳候选。计量阀的驱动允许小部分的喷雾产品释放，由此液化推进剂的压力将溶解或微粒化的药物颗粒带出容器，到达患者。阀动器用来引导气溶胶喷雾剂进入患者的口咽。所述筒可由铝或不锈钢组成，其具有涂有惰性有机涂层的内表面、配备具有63微升计量室的计量阀，所述计量室装备有丁基橡胶垫圈，如WO 03/078538所描述。
如本领域普通技术人员所认识到，本发明的制剂、所递送制剂的量和施用单一配料的持续时间取决于所使用的吸入装置的类型。对于一些气溶胶递送系统，诸如雾化器，施用频率和开动该系统的持续时间将主要取决于在所述气溶胶中治疗多肽的浓度。
例如，在雾化剂溶液中治疗多肽的浓度较高的情况下，可以采用较短的施用时间。装置诸如计量吸入器可以产生较高的气溶胶浓度，并可以操作较短的时间来递送期望量的多肽。装置诸如粉末吸入器递送活性剂，直到给定料量的药剂从所述装置放出。在这类吸入器中，在给定量的粉末中根据本发明的组合物的量决定在单一施用中递送的剂量。
在通过吸入装置递送的制剂中多肽诸如胰岛素的多肽的粒度对于例如胰岛素使其进入肺并进入下呼吸道或肺泡而言是关键的。在发明的组合物中的多肽可以被配制，使得至少约10％所递送的多肽沉积在肺中，例如约10至约20％或以上。众所周知，采用约2μm至约3μm的粒度，获得口呼吸人类的肺部沉积最大效率。当粒度在高于大约5μm时，肺部沉积实质上降低。低于约1μm的粒度导致肺部沉积降低，并且变得难以以足以有效治疗的质量递送颗粒。因此，通过吸入递送的多肽颗粒具有小于约10μm的粒度，例如在约1μm至约5μm的范围内。多肽的配制被选择，以在所选择的吸入装置中产生期望的粒度。
多肽溶液可任选地与适于呼吸和肺部施用的药物载体或赋形剂结合。当期望降低在正递送给患者的液体中治疗多肽诸如胰岛素的浓度时，这样的载体可仅仅用作填充剂，但也可用于增强所述组合物的稳定性。
适当的材料包括糖类，例如(a)单糖诸如果糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖山梨糖等；二糖，诸如乳糖、海藻糖纤维二糖等；环胰岛淀粉样多肽，诸如2-羟丙基-环胰岛淀粉样多肽；和多糖，诸如棉子糖、麦芽糖胰岛淀粉样多肽、右旋糖酐等；(b)氨基酸，诸如甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸等；(c)从有机酸和碱制备的有机盐，诸如柠檬酸钠、抗坏血酸钠、葡萄糖酸镁、葡糖酸钠、氨基丁三醇盐酸盐等；(d)肽和蛋白质，诸如阿司帕坦、人血清白蛋白、明胶等；(e)糖醇诸如甘露糖醇、木糖醇等。优选的载体组包括乳糖、海藻糖、棉子糖、麦芽糖胰岛淀粉样多肽、甘氨酸、柠檬酸钠、氨基丁三醇盐酸盐、人血清白蛋白和甘露糖醇。
这样的载体材料可以在脱水诸如喷雾干燥之前与所述治疗多肽结合，即通过将所述载体材料添加至准备喷雾干燥的多肽溶液。那样，载体材料将与蛋白质颗粒同时形成并作为蛋白质颗粒的一部分。
通常，当所述载体通过喷雾干燥与所述多肽一起形成时，所述多肽在每一单个颗粒中将以范围在5％至95％、优选20％至80％的重量百分数存在。所述颗粒的其余部分将主要是载体材料(按重量计算一般从5％至95％、通常20％至80％)，但是将还包括缓冲剂(一种或多种)，可包括其它成分，如上所述。
非含水胰岛素制剂还可与其它活性组分结合。例如，在胰岛素制剂中结合少量的胰岛淀粉样多肽或活性胰岛淀粉样多肽类似物来改善糖尿病的治疗可能是期望的。胰岛淀粉样多肽是在正常(非糖尿病)个体中从胰腺0-细胞与胰岛素一起分泌的激素。据认为，胰岛淀粉样多肽调节体内胰岛素活性，并且已经提出，胰岛淀粉样多肽与胰岛素的同时施用可以改善血糖控制。在本发明的组合物中结合胰岛淀粉样多肽与胰岛素将提供特别方便的产品，用于实现这样的同时施用。胰岛淀粉样多肽可以以按重量计0.1％至按重量计10％(基于剂量中胰岛素的总重量)、优选按重量计0.5％至按重量计算2.5％与胰岛素结合。胰岛淀粉样多肽可获自商业供应商，诸如Amylin Corporation，San Diego，California，并且可以容易地配制在本发明的组合物中。例如，胰岛淀粉样多肽可以与胰岛素以及任选的载体一起溶于水或其它适当的溶液，并且所述溶液被喷雾干燥以产生粉末产品。
包括喷雾干燥的多肽的喷雾可以通过在压力下迫使多肽的悬浮体或溶液通过喷嘴而产生。喷嘴尺寸和结构、施加的压力和液体送料速率可以被选择，以实现期望的输出和粒度。在毛细管或喷嘴送料方面，例如通过电场，可以产生电喷雾。
有利地，例如通过喷雾器递送的胰岛素的颗粒具有小于约10μm的粒度，例如在约1μm至约5μm的范围内。
含有溶于半极性质子有机溶剂诸如多元醇中的脱水诸如喷雾干燥的多肽的本发明药物组合物也可以被肠胃外施用给需要这样的治疗的患者。
利用注射器、任选地利用钢笔样注射器，通过皮下、肌内或静脉注射，可以进行肠胃外施用。可选地，利用输液泵，可以进行肠胃外施用。
在泵诸如胰岛素泵方面，可以使用本发明的制剂。胰岛素泵可以被前置(prefix)并且是一次性的，或者胰岛素制剂可以由移动式容器供应。胰岛素泵可以被装在皮肤上、植入或携带，并且胰岛素制剂从泵的储料室到所述患者的路径可以或多或少是弯曲的。胰岛素泵的非限制实例被公开于US 5,957,895、US 5,858,001、US4,468,221、US 4,468,221、US5,957,895、US 5,858,001、US6,074,US、US5,858,001、US 5,527,288和US 6,074,369。
脱水诸如喷雾干燥的多肽的本发明的可注射组合物可以使用制药工业的传统方法加以制备，其包括将所述组分酌情溶解在半极性质子有机溶剂诸如多元醇中并使之混合，得到期望的终产品。
目前，注射是施用生物学活性蛋白质至体循环的典型模式。通过注射，接受者可能经历不适或疼痛。由于这个原因和其它原因，使用注射作为施用模式，患者顺从性可能存在问题。注射的一个替代选择是口服施用生物学活性多肽。在胰岛素的情况下，除了方便和顺从性问题外，口服递送还可具有优点。在胃肠道中吸收的胰岛素模拟通过胰腺分泌的胰岛素的生理学，因为两者都释放入门脉并被直接运送至肝脏。吸收入门脉循环保持外周-门脉胰岛素梯度，该梯度调节分泌。在其首过肝脏时，约60％的胰岛素得以保持并代谢，从而降低了外周高胰岛素血的发生率，高胰岛素血是糖尿病相关全身并发症的一个因素。胰岛素治疗和其它口服抗糖尿病药的一个令人担心但并非罕见的并发症是低血糖。
然而，多肽的口服生物利用度极其低，原因在于在胃肠道中大规模的蛋白水解降解以及低的上皮渗透性。例如，酶促降解研究已经表明，天然胰岛素在胰蛋白酶和α胰凝乳蛋白酶存在的情况下广泛降解。因此，通过蛋白质工程诸如聚乙二醇化和热点突变，针对蛋白水解降解稳定化多肽，这是改善口服生物利用度的常用策略。另一个减少蛋白水解降解的策略是将多肽并入纳米颗粒、微粒、微乳剂、微乳化预浓缩物、脂质体等。所述药物仅仅得到保护使之免于胃和胃肠道中的有害环境的影响，而且这些颗粒可以从肠内路线经由派伊尔氏淋巴集结进入体循环而被吸收。
在一个实施方式中，所述药物非含水组合物是微乳化预浓缩物。这是一种在用水介质例如水或胃肠液稀释后自发地自我乳化成例如水包油(o/w)微乳剂。微乳剂被理解为热力学稳定的系统，其具有在较低nm范围例如在20-400nm之间的乳化相的平均域大小(mean domain size)。
通常，微乳化预浓缩物包含一种或多种亲水性成分、一种或多种亲脂性成分、一种或多种非离子型表面活性剂和/或助表面活性剂以及活性成分例如完全溶于所述预浓缩物混合物中的治疗肽或蛋白质。此外，如果适当，所述微乳化预浓缩物可包含常规的佐剂和添加剂。
这些自我(微)乳化预浓缩物可以被摄取，预期微乳剂在胃肠道中形成。所述微乳化预浓缩物可以包封在肠溶包衣的软明胶胶囊中进行施用。
已经报道，许多微乳剂在口服之后增强若干治疗化合物的生物利用度。
微乳化预浓缩物的组合物的实例是：
a)至少一种半极性质子有机溶剂诸如多元醇(例如丙二醇和/或甘油)
b)一种或多种亲水性成分诸如甘油和/或丙二醇
b)一种或多种亲脂性成分，诸如油类(例如甘油一酸酯、甘油二酸酯和/或甘油三酸酯)
c)一种或多种非离子型表面活性剂，诸如泊洛沙姆和/或聚山梨酸酯
d)一种或多种助表面活性剂诸如乙醇
e)脱水治疗活性多肽(例如胰岛素)
f)一种或多种添加剂，诸如抗氧化剂和/或稳定剂。
含有溶于半极性质子有机溶剂诸如多元醇中的脱水诸如喷雾干燥的治疗活性多肽的本发明药物组合物也可以以气溶胶化喷雾剂的形式被颊部或舌下施用给需要这样的治疗的患者。由Generex BiotechnologyCorporation开发的Oral-lynTM制剂是经由加压计量吸入剂(pMDI)经颊部施用的颊部气雾剂的实例。氢氟烷(HFA)诸如HFA 134a和227通常用作推进剂。在一个实施方式中，本发明的治疗活性多肽在低于或高于pI超过1个单位的pH值下一般高度可溶于水。因为水与HFA推进剂极其不混溶，对于所述蛋白质，使用溶剂诸如丙二醇和乙醇是有利的。所述溶剂与HFA推进剂可混溶。溶液型计量吸入器相对于悬液型pMDI通常是优选的，悬液型pMDI在剂量均一性方面往往具有较大的变化，原因在于颗粒的乳油化或沉降。
除了治疗活性多肽之外，所述溶液型pMDI还可以与稳定剂及其他添加剂诸如渗透增强剂一起配制。
代替加压系统，可选地，所述治疗活性多肽可作为可泵送剂进行颊部或舌下施用，例如用于硝化甘油的舌下施用的Coro Nitro Pump
Figure A20088001759900311
为了避免肺部沉积，口服喷雾气溶胶应该优选具有大于10μm的小滴直径。
粘膜粘附药物递送系统已经在非侵入性蛋白质/肽递送中引起很大的兴趣。它们可增加递送系统在粘膜组织上的停留时间。已经报道，若干生物粘附递送系统在口服之后增强例如蛋白质和肽的生物利用度。
在优选的实施方式，非含水游离生物粘附组合物包含活性蛋白质或肽、至少一种生物粘附聚合物和一种或多种半极性质子有机溶剂诸如多元醇(一种或多种)。此外，如果适当，所述组合物可包含常规的佐剂和添加剂。所述生物粘附聚合物可例如是聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)-聚(环氧乙烷)嵌段共聚物(诸如泊洛沙姆)、聚乙烯吡咯烷酮(诸如聚维酮或PVP)、聚丙烯酸、聚卡波非(诸如卡波普或卡波姆)、脱乙酰壳多糖、各种硫醇盐聚合物(诸如Thiomers)、纤维素、澡酸盐、羟乙基纤维素或其它生物粘附聚合物。
所述组合物可以是液体、半固体或固体剂型。
相比于例如常规生物粘附水凝胶，这些新的组合物将具有这样的优点：在这些直接中所要求的水介质可以被避免，并且其增加的储藏稳定性以及增加的生物利用度(由多元醇引发)将得到实现。
生物粘附组合物的实例是：
a)脱水治疗活性多肽(例如胰岛素)
b)至少一种半极性质子有机溶剂诸如多元醇(例如丙二醇和/或甘油)
c)生物粘附聚合物(例如聚维酮和/或泊洛沙姆)
d)添加剂
在一个实施方式中，非含水组合物包含脱水治疗活性多肽、至少一种半极性质子有机溶剂诸如多元醇和一种或多种常规渗透增强剂的组合。渗透增强剂的实例是但不限于脂肪酸、棕榈酰肉碱氯化物、乙二醇-二(β-氨乙基醚)-N，N，N′，N′-四乙酸(EGTA)、EDTA、胆汁盐、离子型表面活性剂以及非离子型表面活性剂诸如磷脂和烷基糖苷、聚合物、脱乙酰壳多糖、柠檬酸和水杨酸钠。此外，如果适当，所述组合物可包含常规的佐剂和添加剂。
本发明的组合物可以以选自例如用于颊部施用和口服施用的片剂、胶囊、栓剂、液体、喷雾剂或气溶胶的形式加以施用。
在优选的实施方式中，基于半极性质子有机溶剂(一种或多种)诸如多元醇的固体剂型包含至少一种多元醇和一种或多种在室温下为固体的赋形剂，例如泊洛沙姆、PEG或PEG硬脂酸酯。
在另一个实施方案中，所述组合物包含脱水治疗活性多肽、至少一种半极性质子有机溶剂诸如至少一种多元醇、和至少一种在室温下为固体的非离子型赋形剂例如泊洛沙姆或聚氧化亚乙基二醇或固体赋形剂的混合物。固体泊洛沙姆的实例是Pluronic F-127、Pluronic F-68。固体PEG的实例是PEG 3350、PEG 4000、PEG 8000。此外，如果适当，固体组合物可包含常规佐剂和添加剂诸如粘合剂、助流剂和润滑剂，以确保有效压片；和崩解剂，以确保所述片剂在消化道内分裂。
片剂和胶囊可以涂有肠溶衣，其在接触具有限定pH的液相环境后破裂或变得可渗透，使所述剂型通过对于具体的区域选择适当的pH可溶性聚合物得以在胃肠道中期望的位置选择性释放。适当的肠溶聚合物的实例包括但不限于醋酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸共聚物、虫胶、邻苯二甲酸甲基纤维素、醋酸偏苯三酸纤维素(cellulose acetate trimellitate)、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(hydroxypropylmethylcellulose acetate succinate)、醋酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、醋酸苹果酸纤维素、苯甲酸邻苯二甲酸纤维素、丙酸邻苯二甲酸纤维素、羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸乙基羟乙基纤维素、虫胶、苯乙烯-丙烯酸共聚物、丙烯酸甲酯-丙烯酸共聚物、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、丙烯酸丁酯-苯乙烯-丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸-丙烯酸乙酯共聚物、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-丙烯酸辛酯共聚物、醋酸乙烯酯-马来酸酐共聚物、苯乙烯-马来酸酐共聚物、苯乙烯-马来酸单酯共聚物、乙烯基·甲基醚-马来酸酐共聚物、乙烯马来酸酐共聚物、乙烯基·丁基醚-马来酸酐共聚物、丙烯腈-丙烯酸甲酯-马来酸酐共聚物、丙烯酸丁酯-苯乙烯-马来酸酐共聚物、聚乙烯醇邻苯二甲酸酯、聚乙烯醇缩醛邻苯二甲酸酯(polyvinyl acetalphthalate)、聚乙烯醇丁酰邻苯二甲酸酯(polyvinyl butylate phthalate)和聚乙烯乙酰缩醛邻苯二甲酸酯(polyvinyl acetoacetal phthalate)或它们的组合。
在优选的实施方式中，所述剂型是包含液体的软明胶胶囊。
本发明还涉及下列实施方式：
1.一种药物非含水组合物，其包含下列的混合物：
a)优选包含10-100个氨基酸的脱水治疗活性多肽，和
b)至少一种半极性质子有机溶剂
该多肽已经在靶pH下进行脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位，并且其中所述靶pH的范围优选在约6.0至约9.0。
2.一种药物非含水组合物，其包含下列的混合物：
a)优选包含10-100个氨基酸的脱水治疗活性多肽，和
b)至少一种半极性质子有机溶剂
该多肽已经在靶pH下进行脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位，并且其中所述靶pH的范围优选在约6.0至约9.0。
条件是所述多肽不是促胰岛素肽、GLP-1(7-37)或其类似物或衍生物、或者毒蜥外泌肽或其类似物或衍生物。
3.根据实施方式1或2所述的药物组合物，其中所述有机溶剂选自多元醇。
4.根据实施方式3所述的药物组合物，其中所述有机溶剂选自二醇和三醇。
5.根据实施方式4所述的药物组合物，其中所述有机溶剂选自丙二醇和甘油。
6.根据实施方式5所述的药物组合物，其中所述有机溶剂是丙二醇。
7.根据实施方式5所述的药物组合物，其中所述有机溶剂是甘油。
8.根据实施方式1-7任一个所述的药物组合物，其中所述多肽被喷雾干燥。
9.根据实施方式1-7任一个所述的药物组合物，其中所述多肽被冷冻干燥。
10.根据实施方式1-9任一个所述的药物组合物，其中所述多肽已经在靶pH下脱水，靶pH距所述多肽的pI至少1.5个pH单位。
11.根据实施方式1-10任一个所述的药物组合物，其中所述多肽已经在靶pH下脱水，靶pH距所述多肽的pI至少2个pH单位。
12.根据实施方式1-11任一个所述的药物组合物，其中所述多肽已经在靶pH下脱水，靶pH高于所述多肽的pI至少2.5个pH单位。
13.根据实施方式1-12任一个所述的药物组合物，其中脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度是至少20mg/ml。
14.根据实施方式1-12任一个所述的药物组合物，其中脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度是至少30mg/ml。
15.根据实施方式1-12任一个所述的药物组合物，其中脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度是至少40mg/ml。
16.根据实施方式1-12任一个所述的药物组合物，其中脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度是至少50mg/ml。
17.根据实施方式1-12任一个所述的药物组合物，其中脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度是至少60mg/ml。
18.根据实施方式1-17任一个所述的药物组合物，其中所述靶pH的范围为约6.5至约8.5。
19.根据实施方式1-17任一个所述的药物组合物，其中所述靶pH的范围为约7.2至约8.3。
20.根据实施方式1-17任一个所述的药物组合物，其中所述靶pH的范围为约7.0至约8.5。
21.根据实施方式1-20任一个所述的药物组合物，其中所述有机溶剂以至少20％w/w的量存在。
22.根据实施方式1-20任一个所述的药物组合物，其中所述有机溶剂以至少30％w/w的量存在。
23.根据实施方式1-20任一个所述的药物组合物，其中所述有机溶剂以至少40％w/w的量存在。
24.根据实施方式1-20任一个所述的药物组合物，其中所述有机溶剂以至少50％w/w的量存在。
25.根据实施方式1-20任一个所述的药物组合物，其中所述有机溶剂以至少80％w/w的量存在。
26.根据实施方式1-25任一个所述的药物组合物，其包含小于10％w/w的水。
27.根据实施方式1-25任一个所述的药物组合物，其包含小于5％w/w的水。
28.根据实施方式1-25任一个所述的药物组合物，其包含小于2％w/w的水。
29.根据实施方式1-28任一个所述的药物组合物，所述组合物用于肺部、肠道外、经鼻或口服治疗糖尿病或高血糖。
30.根据实施方式1-28任一个所述的药物组合物，所述组合物用于肺部治疗糖尿病或高血糖。
31.根据实施方式1-28任一个所述的药物组合物，所述组合物用于口服治疗糖尿病或高血糖。
32.根据实施方式1-31任一个所述的药物组合物，其中所述多肽是水溶性的。
33.根据实施方式1-32任一个所述的药物组合物，其中所述多肽选自胰岛素肽、胰岛淀粉样多肽、胰岛淀粉样多肽类似物胰岛淀粉样多肽衍生物、α-MSH、α-MSH类似物、α-MSH衍生物和/或其任何组合。
34.根据权利要求1-33任一个所述的药物组合物，其中所述胰岛素肽是胰岛素类似物。
35.根据实施方式1-34任一个所述的药物组合物，其中所述胰岛素肽是胰岛素类似物，所述胰岛素类似物选自AspB28人胰岛素；LysB28ProB29人胰岛素；LysB3GluB29人胰岛素和A14GluB25HisdesB30人胰岛素。
36.根据实施方式1-35任一个所述的药物组合物，其中所述组合物适于肺部治疗、口服治疗、经鼻治疗或颊部治疗。
37.根据实施方式1-35任一个所述的药物组合物，其中所述多肽适于肺部应用。
38.根据实施方式1-35任一个所述的药物组合物，其中所述多肽适于经鼻治疗。
39.根据实施方式1-35任一个所述的药物组合物，其中所述多肽适于口服应用。
40.根据实施方式1-35任一个所述的药物组合物，其中所述多肽适于颊部应用。
41.治疗需要这样的治疗的患者的糖尿病的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的根据实施方式1-40任一个所述的药物组合物。
42.治疗或预防需要这样的治疗的患者的高血糖、II型糖尿病、受损葡萄糖耐量(impaired glucose tolerance)和I型糖尿病的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的根据实施方式1-40任一个所述的药物组合物。
43.延迟或预防需要这样的治疗的患者的II型糖尿病疾病进展的方法，其包括向所述患者施用有效量的根据实施方式1-40任一个所述的药物组合物。
44.根据实施方式1-40任一个所述的药物组合物，其用作治疗或预防高血糖、II型糖尿病、受损葡萄糖耐量和I型糖尿病的药物。
45.根据实施方式1-40任一个所述的药物组合物，其用作延迟或预防II型糖尿病疾病进展的药物。
在本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，通过引用以其全部内容并且以如同每一参考文献被单独并明确地表明通过引用并入并以其全部内容在本文描述的程度(法律允许的最大程度)由此并入。
在本文全部标题和小标题仅为了方便起见而使用，并且不应该以任何方式解释为限制本发明。
在本文提供的任何和全部实例的使用，仅意图更好地阐明本发明，而不对本发明的范围施加限制，除非另外说明。在说明书中没有语言应该被解释为表明任何为要求的要素为本发明的实践所必要的。
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实施例
一般步骤
硫磺素(thioflavin)T(ThT)原纤化作用测定：原理和实例
肽的低物理稳定性可导致淀粉样蛋白原纤维形成，其在样品中被观察为有序、丝状大分子结构，最后引起凝胶形成。这在传统上通过肉眼检查样品来加以测量。然而，这种测量具有很强的主观性并取决于观察者。因此，小分子指示探针的应用是更加有利得多。硫磺素T(ThT)是这样的探针并且当结合原纤维时具有独特的荧光标记[Naiki et al.(1989)Anal.Biochem.177，244-249；LeVine(1999)Methods.Enzymol.309，274-284]。
动态(加速)ThT测定
原纤维形成的时程可通过具有下列表达式的S形曲线加以描述[Nielsen et al.(2001)Biochemistry 40，6036-6046]，参见图6：
F = f i + m i t + f f + m f t 1 + e - [ ( t - t 0 ) / τ ] 方程(1)
这里，F是在时间t时的ThT荧光。常数t0是达到最大荧光的50％所需要的时间。描述原纤维形成的两个重要的参数是通过t0-2τ计算的滞后时间和表观速率常数kapp＝1/τ。
Figure A20088001759900381
所述肽的部分折叠的中间体的形成被提出为原纤化作用的一般性引发机制。那些中间体的少数成核，形成模板，在该模板上进一步的中间体可装配并且原纤化作用继续进行。滞后时间相应于其中原子核的临界质量得以增加且表观速率常数是原纤维本身形成的速率的间隔。
样品制备
在每一测定之前新制备样品。从在H2O中的储备溶液添加硫磺素T至样品，达到1μM的最终浓度。200μl的等分样品被置于96孔微量滴定板(Packard OptiPlateTM-96，白色聚苯乙烯)。通常，每一样品的八份(相应于一个测试条件)被放入一列孔中。该板用Scotch Pad(Qiagen)密封。
温育和荧光测量
在Fluoroskan Ascent FL荧光板读数器(Thermo Labsystems)中进行在给定温度下温育、摇动和测量ThT荧光发射。温度被调节至37℃。定轨摇动(orbital shaking)被调节至960rpm，其中在所有给出的数据中，幅度为1mm。通过444nm滤波器激发和通过485nm滤波器测量发射，进行荧光测量。
通过在测定温度下温育所述板10min，开始每次试验。每20分钟对板进行测量，通常进行45小时。在每一次测量之间，如所述摇动和加热所述板。
静态ThT测定
样品制备和荧光测量
包含处于无水丙二醇中的门冬胰岛素的样品在5和40℃储存达到1个月。在测量之前将样品用去离子水稀释至1mg/ml的预期浓度(包括原纤维化蛋白质和天然蛋白质)。使用Perkin-Elmer型号LS 50 B发光分度计，采用0.3cm激发光路，在半微量石英比色杯(Hellma，Germany)中进行荧光测量。在添加4μl之后ThT的1mM储备溶液到196μl稀释的样品之后，立即记录采用450nm激发和采用5nm狭缝宽度的470至560nm发射光谱。在反应混合物中，ThT的浓度是20μMol/l。结果被报道为I 482nm/[蛋白质浓度(mg/ml)x比色杯径长(cm)]，即结果被归一化至1mg/ml的蛋白质浓度和1cm的比色杯径长。
实施例1
A)人胰岛素的溶解和靶pH调节至7.0
9.5g的人胰岛素被分散在200g冰冷的水中。将悬液置于冰浴上，并测量初始pH，得到pH 5.12。用5.8g冰冷的0.2N氢氧化钠调节pH至7.04。溶液仍保持在冰浴上另外2个小时，然后添加去离子水至总重量240g。
进一步处理50g所述pH 7.04溶液。用冰冷的1N NH4OH调节pH至7.04～7.50，然后将其放入冰箱中过夜。第二天，调节pH至7.32，并用冰冷的1N NH4OH调节pH至pH 8.06。然后，添加水达到60.0g。人胰岛素的最终浓度为大约30mg/ml。
B)胰岛素水溶液的干燥
在配备有0.7mm并流两液喷嘴的Büchi B-290小型喷雾干燥器(Büchi，Labortechnik AG Flawil，Switzerland)上制备干燥的固体微粒。以2ml/min的液体送料速率和800升/小时的雾化气流，使所述人胰岛素溶液在干燥室中雾化入热空气流。
干空气具有150℃的入口温度和35m3/小时的干空气流速。出口温度为大约70℃。
通过连接到所述干燥室的旋风分离器获取固体微粒，然后收集并在干燥条件下储存。
C)固体胰岛素粉末的靶pH的证实
使喷雾干燥的人胰岛素以40mg/mL、80mg/mL和160mg/mL的浓度再溶于去离子水，以研究不同的浓度对测量的pH值是否具有影响：
25.3mg被添加至633μL水：pH被测量为6.95
43.5mg被添加至545μL水：pH被测量为6.95
81.7mg被添加至510μL水：pH被测量为7.01
实施例2
具有靶pH范围为pH 5.4至pH 7.4在1，2-丙二醇(丙二醇)中的溶解。
在喷雾干燥之前制备具有不同靶pH值的各种门冬胰岛素溶液。
溶液A，靶pH 5.35：
在冰浴上将16g门冬胰岛素悬浮在150ml水中。接下来，逐渐添加2.6ml的冰冷浓氨水(25％w/w)，直到pH为7.53并且获得透明溶液。最后，添加水，达到40mg/ml的门冬胰岛素终浓度。
溶液B，靶pH 6.04：
在冰浴上将16g门冬胰岛素悬浮在150ml水中。首先，逐渐添加2.2ml的冰冷的1N NaOH，然后是750μl的冰冷的浓氨水(25％w/w)，直到pH为7.52并且获得透明溶液。最后，添加水，达到40mg/ml的门冬胰岛素终浓度。
溶液C，靶pH 6.27：
在冰浴上将16g门冬胰岛素悬浮在150ml水中。首先，逐渐添加4.4ml的冰冷的1N NaOH，然后是750μl的冰冷的浓氨水(25％w/w)，直到pH为7.48并且获得透明溶液。最后，添加水，达到40mg/ml的门冬胰岛素终浓度。
溶液D，靶pH 6.66：
在冰浴上将16g门冬胰岛素悬浮在150ml水中。首先，逐渐添加6.6ml的冰冷的1N NaOH，然后是370μl的冰冷的浓氨水(25％w/w)，直到pH为7.47并且获得透明溶液。最后，添加水，达到40mg/ml的门冬胰岛素终浓度。
溶液E，靶pH 7.47：
在冰浴上将16g门冬胰岛素悬浮在150ml水中。首先，逐渐添加9.6ml的冰冷1N NaOH，直到pH为7.49并且获得透明溶液。
在配备有0.7mm并流两液喷嘴的Büchi B-290小型喷雾干燥器(Büchi，Labortechnik AG Flawil，Switzerland)上制备干燥粉末。以2ml/min的液体送料速率和800升/小时的雾化气流，使所述液料(溶液A、B、C、D和E)在干燥室中雾化入热空气流。
干空气具有150℃的入口温度和35m3/小时的干空气流速。出口温度在41和61℃之间变化
通过连接到所述干燥室的旋风分离器获取干燥粉末，然后收集并在干燥条件下储存。
使用PerkinElmer Pyris TGA1热重分析仪，通过在110℃干燥失重最少3小时，测定干燥微粒的含水量。记录由水分损失所引起的重量变化并以重量百分数表示。
通过将喷雾干燥的粉末以大约40mg/ml的浓度溶解在去离子水中并通过电位计(Radiometer，Denmark)测量pH，测量喷雾干燥的胰岛素的靶pH。
喷雾干燥粉末的表征：
溶液     水含量(％w/w)  靶pH
A        5.6            5.35
B        6.3            6.04
C        6.7            6.27
D        5.9            6.66
E        6.6            7.43
通过添加固体粉末入螺口小瓶(通常为200mg的粉末)，接着添加2g 1，2-丙二醇(丙二醇)，测量各种门冬胰岛素粉末的溶解度。在环境温度，在Swelab 820混合器(Boule Medical AB)上，以15rpm摇动粉末和1，2-丙二醇(丙二醇)至少48小时。如果1，2-丙二醇(丙二醇)澄清，则向所述小瓶添加更多的粉末。然后，通过在4000rpm离心0.5小时，将溶解的门冬胰岛素与未溶解的门冬胰岛素分离。通过HPLC测量上清液中的门冬胰岛素浓度。来自HPLC分析的结果示于图1中。
实施例3
靶pH为7.5的门冬胰岛素在各种有机半极性质子溶剂中的溶解。
如实施例2所描述，测量靶pH为7.5的门冬胰岛素在各种有机半极性质子溶剂(乙二醇(乙二醇)；1，4-丁二醇；1，3-丁二醇；1，3-丙二醇、丙三醇(甘油)；1，2-丙二醇(丙二醇))中的溶解。
来自溶解度研究的结果示于图2中。
实施例4
门冬胰岛素10％丙二醇制剂在大鼠肠管模型中的体外评价
在冰冷盐水中漂洗新切除大鼠小肠。然后，制备每一个长度为4cm的肠管。简言之，4cm管段的一端用线扎结，然后将0.25ml的含胰岛素试液(1mM)装入所述肠，然后同样扎结另一端。之后，在37℃，在pH 7.4的0.5ml培养基中，温育该填充的肠管2h。在2h之后通过HPLC和MALDI分析培养基的渗透胰岛素。HPLC分析结果示于图3。观察到在10％PG存在下，胰岛素以较高的含量渗透穿过肠粘膜。
使用MALDI-MS(基质辅助激光解吸/离子化质谱)来分析降解产物。酸化样品溶液和参考样品的等分试样(1μl)在PAC384 MALDI板上沉积、在30s之后用滤纸进行印迹，并用5μl的15mM 0.1％TFA中的磷酸铵洗涤两次。使用Autoflex TofTof(Bruker Daltonics，USA)，分析样品。结果示于图4。PG似乎降低胰岛素在胃肠道的降解。
实施例5
口服给药之后门冬胰岛素丙二醇制剂在大鼠中的体内评价
使用Sprague-Dawley大鼠。在实验之前，对大鼠进行禁食，但可自由饮水。大鼠被分成4组。两组大鼠用溶解在水中或者在1，2-丙二醇(丙二醇)中的1.2ml/kg A14GluB25HisdesB30人胰岛素(8mM)管饲。其它两组分别接受1.2ml/kg纯水或1，2-丙二醇(丙二醇)，作为对照。在240分钟的期间内，以20分钟的间隔，从尾部静脉收集血液并分析葡萄糖水平。结果被表示为△血糖(mmol/l)。结果示于图5。
实施例6
在丙二醇(PG)中的门冬胰岛素的圆二色谱
远-UV和近-UV圆二色性测量被用于监控构象稳定性。在JascoJ-715圆二色性分光光度计(Jasco，Tokyo，Japan)上获得远-UV和近-UV圆二色谱。使用2.0nm的带宽、2s的响应时间、0.5nm的数据间距和20nm/min的扫描速度，在0.5或0.02cm小室中扫描胰岛素样品。记录缓冲液的光谱，并从样品光谱中减去。
远-UV谱检测肽酰胺生色团并可用于估计蛋白质二级结构，因此在209nm和222nm处的负带表示α螺旋结构。相比于在100％水中，在100％PG中的Aspart的光谱(图6)中观察到强度的轻微改变，表明在100％PG中的胰岛素具有更多的α螺旋。然而，当比较Aspart在PG中的不同制剂时，该差异似乎不显著。水中Aspart的光谱和稀释到2％PG的Aspart的光谱很相似，表明α螺旋的可能的微小变化是可逆的。
在250-350nm区中的圆二色谱反映除了二硫化物桥局部环境之外的酪氨酸侧链残基的局部环境。在100％PG中的门冬胰岛素的远-UV谱非常类似于对于在变性溶剂例如GuHCl中的胰岛素观察到的远-UV谱，其在250nm和270nm的振幅增加。然而，当在100％PG中的胰岛素在水中被稀释至2％PG时，所述光谱保持对于在纯水中的胰岛素观察到的光谱的形状。这表明，尽管PG对于侧链环境有影响，但这些结构效应是可逆的。
考虑FUV和NUC圆二色性数据两者，数据表明所述肽主链的二级结构在100％PG中大致无变化。同一样品的侧链环境的显著改变表明胰岛素呈现所谓的熔球结构(molten globule structure)，其中主链折叠完好，但侧链结构已塌陷。然而，当PG在水中稀释时，所述结构变化是可逆的。
实施例7
门冬胰岛素在丙二醇溶液对比水溶液中的储存稳定性
门冬胰岛素(IA)的靶pH为7.5的脱水粉末溶于纯丙二醇或0.1M pH7.5的TRIS含水缓冲液。胰岛素在所述溶液中的浓度为大约35mg/ml。在环境温度和40℃温育所述溶液达40周。通过大小排阻层析(SEC)，分析可溶共价二聚物和聚合物产物的含量。使用Waters胰岛素HMWP柱7.8×300mm(Waters Corporation，Milford，MA，USA)，在1ml/min的流速下，采用包含15体积的冰醋酸、15体积的乙腈和70体积的0.65g/lL-精氨酸溶液的洗脱液，在室温下对样品进行SEC。在276nm进行检测。通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)，分析脱酰胺基产物及其他胰岛素相关物质的含量。通过静态ThT测定，测量在样品中原纤维的量。
序列表
<110>Novo Nordisk A/S
<120>稳定的非含水药物组合物
<130>7634.000-EP
<160>2
<170>PatentIn version 3.4
<210>1
<211>31
<212>PRT
<213>人(Homo Sapiens)
<400>1
His Ala Glu His Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1         5            10           15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
       20           25             30
<210>2
<211>39
<212>PRT
<213>毒蜥(Heloderma suspectum)
<400>2
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1         5            10           15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
       20           25            30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
     35

Claims (10)

1.药物非含水组合物，其包含下列的混合物：
a)包含10-100个氨基酸的脱水治疗活性多肽，和
b)至少一种半极性质子有机溶剂，
其中所述多肽已经在靶pH下脱水，靶pH距所述多肽在水溶液中的pI至少1个pH单位。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述有机溶剂选自丙二醇和甘油。
3.根据权利要求1-2任一项所述的药物组合物，其中脱水多肽在所述有机溶剂中的溶解度是至少20mg/ml。
4.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其中所述靶pH的范围为约6.0至约9.0。
5.根据权利要求1-4任一项所述的药物组合物，其中所述有机溶剂以至少20％w/w的量存在。
6.根据权利要求1-5任一个所述的药物组合物，其包含小于10％w/w的水。
7.根据权利要求1-6任一项所述的药物组合物，其中所述组合物适于肺部治疗、口服治疗、经鼻治疗或颊部治疗。
8.根据权利要求1-7任一项所述的药物组合物，其中所述多肽选自胰岛素肽、胰岛淀粉样多肽、胰岛淀粉样多肽类似物、胰岛淀粉样多肽衍生物、α-MSH、α-MSH类似物、α-MSH衍生物和/或其任何组合。
9.根据权利要求1-8任一项所述的药物组合物，其中所述胰岛素肽是胰岛素类似物。
10.根据权利要求1-9任一项所述的药物组合物，其用作治疗或预防高血糖、II型糖尿病、受损葡萄糖耐量和I型糖尿病的药物。
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