DE19906096A1 - Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop - Google Patents

Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop

Info

Publication number
DE19906096A1
DE19906096A1 DE19906096A DE19906096A DE19906096A1 DE 19906096 A1 DE19906096 A1 DE 19906096A1 DE 19906096 A DE19906096 A DE 19906096A DE 19906096 A DE19906096 A DE 19906096A DE 19906096 A1 DE19906096 A1 DE 19906096A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
protein
heparin
sequence
tgf
proteins
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
DE19906096A
Other languages
English (en)
Inventor
Walter Sebald
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Osteopharma Inc
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to DE19906096A priority Critical patent/DE19906096A1/de
Priority to DE50015938T priority patent/DE50015938D1/de
Priority to EP00901137A priority patent/EP1151095B1/de
Priority to CA2362496A priority patent/CA2362496C/en
Priority to AT00901137T priority patent/ATE470713T1/de
Priority to US09/913,467 priority patent/US7253254B1/en
Priority to RU2001123926/15A priority patent/RU2227743C2/ru
Priority to BR0008785-8A priority patent/BR0008785A/pt
Priority to AU21106/00A priority patent/AU762387B2/en
Priority to JP2000598634A priority patent/JP4155711B2/ja
Priority to PCT/EP2000/000637 priority patent/WO2000047736A1/de
Priority to CNB008037183A priority patent/CN1169959C/zh
Publication of DE19906096A1 publication Critical patent/DE19906096A1/de
Priority to JP2007258333A priority patent/JP2008086319A/ja
Priority to JP2008201668A priority patent/JP2009011323A/ja
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/51—Bone morphogenetic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Abstract

Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop, bestehend aus einem Protein aus der TGF-beta Superfamilie, die unter anderem TGF-beta- und/oder BMP- und/oder GDF-Proteine enthält und wobei Aminosäuren der Sequenz (x¶1¶x¶2¶x¶3¶x¶4¶x¶5¶x¶6¶)¶1-4¶ an das Protein aus der TGF-beta Superfamilie angelagert sind.

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Protein mit ei­ nem Heparin-bindenden Epitop bestehend aus einem Protein aus der TGF-β Superfamilie, die unter an­ derem TGF-β- und/oder BMP- und/oder GDF-Proteine enthält und einer Aminosäuresequenz.
Die Proteine der TGF-β Superfamilie, die neben TGF- β-, BMP- und GDF-Proteinen, Inhibine, Aktivine und weitere Proteine umfaßt (siehe Kingsley, 1994, Ge­ nes Dev 8, 133-46), wirken als wichtige Regulatoren der Entwicklung und Differenzierung von Zellen, Ge­ weben und Organen im sich entwickelnden wie auch im erwachsenen Organismus (Reddi, 1998, Nat Biotechnol 16, 247-52). Dabei steht TGF für "transforming growth factor"; BMP für "bone morphogenetic protein" und GDF für "growth and differentation factor". Von besonderer Bedeutung sind neben den TGF-β's einzelne Vertreter der BMP's, wie BMP-2 und BMP-7/OP-1, und der GDFs, wie GDF-5/CDMP-1, die die Entwicklung und Regenerierung von Knochen und Knorpelgewebe in Gang setzen können.
Die TGF-β Superfamilie umfaßt derzeit mehr als 20 verschiedene Proteine, deren Aminosäuresequenzen der umfangreichen Fachliteratur zu entnehmen sind (siehe Kingsley, 1994, Genes Dev 8, 133-46). Die Proteine bestehen aus zwei, durch eine Disulfid­ brücke verknüpfte Polypeptidketten. Kennzeichnendes Merkmal aller bis jetzt strukturell untersuchten Proteine dieser Familie ist das "TGF-β/BMP Gerüst" (Griffith, 1996, Proc Natl Acad Sci USA 93, 878-­ 83), das in jedem Monomer aus einem "Cystinknoten" (Mc Donald and Hendrickson, 1993, Cell 73, 421-4, einer α-Helix und mindestens vier β-Strängen besteht, und das eine besondere Anordnung der Monomeren zeigt. Besonders unterscheiden sich diese Proteine durch die Aminosäuresequenzen in den Loopregionen sowie in den N-terminalen Sequenzen, soweit sie vor dem ersten Cystein des Cy­ steinknotens liegen.
Die Proteine der TGF-Superfamilie werden in der Zelle zuerst als große Proproteine synthetisiert, aus denen dann das reife Protein durch Proteolyse entsteht. Das Proprotein scheint nach einer RXXR Erkennungssequenz gespalten zu werden, so daß eine C-terminale Sequenz von etwa 100 bis 140 Resten, die das reife Protein repräsentiert, frei gesetzt wird.
Die Proteine der TGF-β Superfamilie beeinflussen Zellen im Organismus, indem sie mit Rezeptoren an der Zelloberfläche interagieren (Massague, 1998, Annu. Rev. Biochem. 67, 753-91). Außer mit den für die Funktion essentiellen Rezeptoren können Pro­ teine der TGF-β Superfamilie mit anderen Proteinen interagieren. Beispielsweise ist bekannt, daß das Fetuin/ 2-HS Glykoprotein Proteine der TGF-β Super­ familie bindet, wobei diese Bindung mit der Bindung des Proteins an den Rezeptor kompetiert (M. Deme­ triou et al., 1996, J Biol Chem 271, 12755-61). Da­ durch kann die Aktivität, d. h. die Entfaltung der Wirkung der Proteine durch Bindung an den Rezeptor, gehemmt werden.
Der Nachteil der Proteine der TGF-β Superfamilie besteht darin, daß sie nicht oder nur ungenügend an Heparin-ähnliche Strukturen der extrazellulären Ma­ trix oder der Zelloberfläche ankoppeln, und so nur ungenügend am Ort ihrer Applikation konzentriert und zurückgehalten werden können. Diese Heparin- ähnlichen Strukturen treten in Glykosamino­ glykanen, d. h. unter anderem in Heparansulfat, Chondroitinsulfat, Keratansulfat und Dermatansulfat auf, die als Bestandteil von Proteoglykanen weit verbreitet in der extrazellulären Matrix und auf der Zelloberfläche auftreten (Jackson, 1991, Phsiol. Rev 71, 481-539).
Der Erfindung liegt das Problem zugrunde, die Pro­ teine der TGF-β Superfamilie so zu verändern, daß sie sich verstärkt an Heparin-ähnliche Strukturen anlagern können, und gleichzeitig die Bindung der Proteine an den zellulären Rezeptor nicht beeinträchtigt wird.
Dieses Problem wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß an das Protein aus der TGF-β Superfamilie zu­ sätzliche Aminosäuren der Sequenz (x1 x2 x3 x4 x5 x6)1-4 angelagert werden.
Der Kerngedanke der Erfindung besteht darin, die therapeutisch wirksamen Proteine der TGF-β Superfa­ milie mit einem Heparin-bindenden Epitop zu verse­ hen, wobei unter dem Begriff Heparin-bindendes Epitop zu verstehen ist, daß die zusätzliche Amino­ säurensequenz ein funktionelles Epitop bildet, das sich bevorzugt an Heparin oder Heparin-ähnliche Strukturen anlagert. Solche erfindungsgemäßen Pro­ teine sind durch das Heparin-bindende Epitop in der Lage, sich an die Heparin-ähnliche Strukturen der Proteoglykane in der extrazellulären Matrix bzw. der Zelloberfläche anzulagern. Durch diese Anlagerung erfahren sie eine Lokalisierung und können am Ort ihre therapeutisch gewünschte Wirkung entfalten. Dies ermöglicht die Einstellung einer optimalen Dosis bezüglich Konzentration und zeitlichem Verlauf des Einflusses der Proteine, sowie die örtliche Begrenzung der zellulären Wirkung und die Erhöhung der Spezifität der Wirkung der Proteine. Die Wirkungsweise des Heparin- bindenden Epitops besteht darin, daß die eingefügten Aminosäuren sich an die Heparin- ähnlichen Strukturen binden. Das genaue Prinzip der Bindung ist nicht bekannt. Es wird jedoch vermutet, daß eine elektrostatische Anziehung zwischen den negativ geladenen Gruppen der Heparin-ähnlichen Struktur und den positiv geladenen Gruppen in der zusätzlichen Aminosäuresequenz bewirkt wird. Es ist aber auch möglich, daß bei dem sich anlagernden Heparin-bindenden Epitop die doppelt und/oder dreifach aufeinanderfolgenden basischen Aminosäuren ein komplementäres Ladungsmuster zu den geladenen Gruppen in den Heparin-ähnlichen Strukturen ausbilden, so daß hier möglicherweise über komplementär angeordnete Ladungen eine spezifische und kooperative Bindung zustande kommt (Mulloy, Biochem J, 293, 849-858).
Als Aminosäuresequenzen zur Bildung eines Heparin- bindenden Epitops werden zwei Formulierungen ange­ geben, für die Patentschutz beantragt wird:
(x1 x2 x3 x4 x5 x6)1-4
dabei bedeutet X1 = K, R oder H; X2 = K, R oder H; X3 = K, R, H, oder keine AS; X4 = kein K, R, H, sonst beliebige AS; X5 = kein K, R, H, sonst belie­ bige oder keine AS; X6 = kein K, R, H, sonst belie­ bige oder keine AS. ()1-4 bezeichnet, daß sich diese Sequenz ein- bis viermal wiederholen kann, oder
(x1 x2 x3 x4 x5 x6)1-4
dabei bedeutet X1 = K, R oder H; X2 = kein K, R, H, aber sonst beliebige AS; X3 = K, R oder H; X4 = kein K, R, H, sonst beliebige AS; X5 = kein K, R, H, sonst beliebige oder keine AS; A6 = kein K, R, H, sonst beliebige oder keine AS. ()1-4 bezeichnet, daß sich diese Sequenz ein- bis viermal wiederholen kann, wobei zur Bezeichnung der Aminosäuren der Einbuchstaben-Code verwendet wird und AS für Amino­ säure steht.
Die Herstellung eines erfindungsgemäßen Proteins mit einer zusätzlichen Aminosäuresequenz stellt für den Fachmann kein Problem dar und soll hier kurz beschrieben werden. Die Aminosäuresequenz eines TGF-β Proteins ist bekannt. Es ist also möglich, ein Polynukleotid herzuleiten, das dieses Protein kodiert. Das benötigte Polynukleotid kann entweder vollkommen synthetisch hergestellt werden, es ist aber auch möglich, dieses aus der RNA einer Zelle, die das entsprechende Protein produziert, herzustellen. Die hierzu verwendeten gentechnolo­ gischen Verfahren sind beispielsweise in "Current Protocols in Molecular Biology" (Verlag John Wiley and Sons, Kap. 15.4.1 bis 15.4.6.) beschrieben. Die Nukleotidsequenz, mit der die zusätzlichen Amino­ säuren kodiert werden, kann entweder in dem vollständig synthetischen Polynukleotid bereits enthalten sein, oder beispielsweise durch eine synthetische doppelsträngige DNA mit Hilfe einer Kassetten-Mutagenese in das Polynukleotid einge­ führt werden. Die entsprechenden Methoden sind Stand der Technik. Die so erhaltenen Polynukleotide werden in einen Expressionsvektor eingefügt und in geeignete E. coli Bakterien implantiert. Unter geeigneten Umgebungsbedingungen, d. h. Temperatur, Nährlösung etc. produzieren die so transformierten Bakterien das gewünschte Protein. Das Protein kann anschließend z. B. mit 4 M Guanidiniumchlorid aus den Zellen gelöst werden. Auch die Renaturierung bzw. die Reinigung des Proteins über chromato­ graphische Techniken ist bekannt. Mit diesen Vorgehen wird also ein erfindungsgemäßes Protein erhalten. Auch die Weiterverarbeitung, sprich die Konfektionierung zu einem geeigneten Arzneimittel, das in beliebiger Weise appliziert werden kann, stellt für den Fachmann kein Problem dar.
Vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung sind Ge­ genstand von Unteransprüchen.
Eine mögliche Ausgestaltung der Erfindung besteht nun darin, die N-terminale Sequenz eines Proteins der TGF-β Superfamilie, d. h. die Sequenz vor dem ersten Cystein des Cystinknotens, ganz oder teilweise durch eine erfindungsgemäße Aminosäurese­ quenz zu ersetzen. Dadurch erhält das Protein eben­ falls ein zusätzliches Heparin-bindendes Epitop. Da die N-terminale Sequenz für die Rezeptorbindung des Proteins nicht von entscheidender Bedeutung ist, kann sie durch eine entsprechende Aminosäuren­ sequenz ersetzt werden. Der Vorteil besteht darin, daß das Molekulargewicht eines solchen Proteins nicht oder nur geringfügig vom Molekulargewicht des ursprünglichen Proteins abweicht, wohingegen bei der bloßen Hinzufügung von Aminosäuren das Molekulargewicht des Proteins deutlich größer wird.
Zusätzlich zu der Aminosäuresequenz, die ein Hepa­ rin-bindendes Epitop darstellt, kann vor der N-ter­ minalen Sequenz des Proteins eine weitere Folge von Aminosäuren eingebaut werden mit der Sequenz M oder MX oder MXX, wobei X eine beliebige Aminosäure bedeutet. Diese zusätzlichen Aminosäuren dienen bei der ribosomalen Proteinsynthese in der Zelle als Startsignal.
Die biologische Aktivität der Proteine der TGF-β Superfamilie ist wohlbekannt (1. Reddi, Nat. Bio­ technol., 16, 247-252). Beispielsweise regen BMPs und GDFs die Neubildung und Wiederherstellung des Knochen- und Knorpelgewebes an. Dadurch können sie also als therapeutisches Mittel bei Krankheiten oder Schädigungen des Knochenapparates eingesetzt werden. Durch ihre synthetisch hinzugefügten Aminosäuresequenzen lagern sie sich bevorzugt an die Heparin-ähnlichen Strukturen der extrazellu­ lären Matrix an, wie sie innerhalb und in unmittel­ barer Umgebung dieses Gewebetyps vorhanden sind. Dadurch können bei lokaler Applikation der veränderten Proteine im Organismus Knochen- und Knorpelbildende Zellen angeregt werden, an einem bestimmten Ort neues Knochen- und Knorpelgewebe aufzubauen. Die Konfektionierung der mit Hilfe der Gentechnik hergestellten Proteine zu einem Arz­ neimittel das "in vivo" in beliebiger Weise appli­ ziert wird, ist für den Fachmann kein Problem und kann in vielfältiger Art und Weise geschehen. Besonders seien hier die Erkrankungen und Defekte des Knochenapparates oder auch Schädigungen von Gelenkknorpeln erwähnt, für die die modifizierten Proteine der TGF-β Superfamilie als Arzneimittel verwendet werden sollen.
Weitere Einzelheiten, Merkmale und Vorteile der Er­ findung lassen sich dem nachfolgenden Beschrei­ bungsteil entnehmen, in dem anhand von Zeichnungen ein Ausführungsbeispiel der Erfindung näher erläu­ tert ist. Es zeigen:
Fig. 1 zeigt die Strukturformeln von typischen Heparin-ähnlichen Strukturen,
Fig. 2 zeigt den zeitlichen Verlauf der Bindung verschiedener Proteine an Heparin,
Fig. 3 zeigt den zeitlichen Verlauf der Bindung verschiedener Proteine an einen Rezeptor.
An den in Fig. 1 gezeigten Strukturformeln sind die negativ geladenen Gruppen, die an den Disaccha­ rid-Einheiten auftreten, deutlich zu erkennen. Es handelt sich hierbei vor allem um Carboxylat- und Sulfat-Gruppen. An diesen Heparin-ähnlichen Strukturen lagern sich bevorzugt die zusätzlichen Aminosäuresequenzen in den erfindungsgemäßen Pro­ teinen an, da sie über mehrere positivgeladene Gruppen verfügen.
In Fig. 2 ist der zeitliche Verlauf der Bindung von BMP-2, das eines der die Knochenbildung induzierenden "bone morphogenetic proteins" ist, an eine Heparin-ähnliche Struktur gezeigt. Im Vergleich dazu ist die Bindung zweier Protein­ varianten (T3 und T4), die mit einem Heparin- bindenden Epitop versehen sind, ebenfalls darge­ stellt. Mit dem Heparin-bindenden Epitop ist also die Bindungsfähigkeit an eine Heparin-ähnliche Struktur mehr als verdoppelt und die Abdisso­ ziierung des Proteins wird ebenfalls stark verzögert. Von entscheidender Bedeutung ist jedoch, daß die Rezeptorbindung des Proteins durch die zusätzliche Aminosäurensequenz nicht verändert wird.
Um dies zu beurteilen, wurde sowohl die Bindung von BMP-2, das als Kontrolle dient, als auch die Bindung der mit einem Heparin-bindenden Epitop versehen Varianten (T3 und T4) an einen BMP- Rezeptor untersucht. Die Meßergebnisse des zeitlichen Verlaufs der Bindung des Proteins und seiner Varianten an den Rezeptor sind in Fig. 3 wiedergegeben. Durch die Veränderung des Proteins wird die Bindung an den Rezeptor, sowohl was die Affinität als auch was die Geschwindigkeit der Anlagerung betrifft, nicht beeinflußt. Der entscheidende Befund besteht darin, daß die Rezeptorbindung unabhängig von der Bindung an die Heparin-ähnlichen Struktur erfolgt.

Claims (4)

1. Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop be­ stehend aus einem Protein aus der TGF-β Superfami­ lie, die unter anderem TGF-β- und/oder BMP- und/oder GDF-Proteine enthält, dadurch gekennzeich­ net, daß Aminosäuren der Sequenz (x1 x2 x3 x4 x5 x6)1-4 an das Protein aus der TGF-β Superfamilie angelagert sind, wobei entweder
X1 = K, R oder H; X2 = K, R oder H; X3 = K, R, H, oder keine AS; X4 = kein K, R, H, sonst beliebige AS; X5 = kein K, R, H, sonst beliebige oder keine AS; X6 = kein K, R, H, sonst beliebige oder keine AS, ()1-4 bezeichnet, daß sich diese Sequenz ein­ bis viermal wiederholen kann, bedeutet
oder
X1 = K, R oder H; X2 = kein K, R, H, aber sonst be­ liebige AS; X3 = K, R oder H; X4 = kein K, R, H, sonst beliebige AS; X5 = kein K, R, H, sonst belie­ bige oder keine AS; A6 = kein K, R, H, sonst belie­ bige oder keine AS, ()1-4 bezeichnet, daß sich diese Sequenz ein- bis viermal wiederholen kann, bedeutet.
2. Protein nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die N-terminale Sequenz des Proteins aus der TGF-β Superfamilie ganz oder teilweise durch Amino­ säuren der Sequenz nach Anspruch 1 ersetzt ist.
3. Protein nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein vor der N-terminalen Sequenz zu­ sätzliche Aminosäuren der Sequenz M oder MX oder MXX enthält.
4. Verwendung von Proteinen nach Anspruch 1 bis 3, als Arzneimittel, dadurch gekennzeichnet, daß es zur Behandlung von Knochenschäden, Knorpelschäden und/oder zur Stimulierung des Knochenwachstums eingesetzt wird.
DE19906096A 1999-02-13 1999-02-13 Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop Ceased DE19906096A1 (de)

Priority Applications (14)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19906096A DE19906096A1 (de) 1999-02-13 1999-02-13 Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop
BR0008785-8A BR0008785A (pt) 1999-02-13 2000-01-27 Variantes de polipeptìdeo com capacidade aumentada de ligação com a heparina
AU21106/00A AU762387B2 (en) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptide variants with raised heparin-binding capacity
CA2362496A CA2362496C (en) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptide variants with increased heparin-binding ability
AT00901137T ATE470713T1 (de) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptidvarianten mit erhoehter heparin- bindungsfaehigkeit
US09/913,467 US7253254B1 (en) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptide variants with increased heparin-binding capacity
RU2001123926/15A RU2227743C2 (ru) 1999-02-13 2000-01-27 Полипептидные варианты с повышенной гепаринсвязывающей способностью
DE50015938T DE50015938D1 (de) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptidvarianten mit erhoehter heparin-bindungsfaehigkeit
EP00901137A EP1151095B1 (de) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptidvarianten mit erhoehter heparin-bindungsfaehigkeit
JP2000598634A JP4155711B2 (ja) 1999-02-13 2000-01-27 ヘパリン結合能の亢進したポリペプチド変異体
PCT/EP2000/000637 WO2000047736A1 (de) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptidvarianten mit erhöhter heparin-bindungsfähigkeit
CNB008037183A CN1169959C (zh) 1999-02-13 2000-01-27 高肝素结合力的多肽变异体
JP2007258333A JP2008086319A (ja) 1999-02-13 2007-10-02 ヘパリン結合能の亢進したポリペプチド変異体
JP2008201668A JP2009011323A (ja) 1999-02-13 2008-08-05 ヘパリン結合能の亢進したポリペプチド変異体

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19906096A DE19906096A1 (de) 1999-02-13 1999-02-13 Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE19906096A1 true DE19906096A1 (de) 2000-08-17

Family

ID=7897433

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19906096A Ceased DE19906096A1 (de) 1999-02-13 1999-02-13 Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop
DE50015938T Expired - Lifetime DE50015938D1 (de) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptidvarianten mit erhoehter heparin-bindungsfaehigkeit

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE50015938T Expired - Lifetime DE50015938D1 (de) 1999-02-13 2000-01-27 Polypeptidvarianten mit erhoehter heparin-bindungsfaehigkeit

Country Status (11)

Country Link
US (1) US7253254B1 (de)
EP (1) EP1151095B1 (de)
JP (3) JP4155711B2 (de)
CN (1) CN1169959C (de)
AT (1) ATE470713T1 (de)
AU (1) AU762387B2 (de)
BR (1) BR0008785A (de)
CA (1) CA2362496C (de)
DE (2) DE19906096A1 (de)
RU (1) RU2227743C2 (de)
WO (1) WO2000047736A1 (de)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7981862B2 (en) 2003-08-19 2011-07-19 Biosurface Engineering Technologies, Inc. Composition comprising BMP-2 amplifier/co-activator for enhancement of osteogenesis
US7482427B2 (en) * 2002-08-20 2009-01-27 Biosurface Engineering Technologies, Inc. Positive modulator of bone morphogenic protein-2
US8328876B2 (en) 2003-12-31 2012-12-11 Warsaw Orthopedic, Inc. Bone matrix compositions and methods
WO2006125868A1 (en) * 2005-05-27 2006-11-30 Bbs-Bioactive Bone Substitutes Oy Bone morphogenetic proteins containing a heparin binding site and osteogenic devices and pharmaceutical products containing thereof
US7951384B2 (en) * 2005-08-05 2011-05-31 University Of Massachusetts Virus-like particles as vaccines for paramyxovirus
US9216212B2 (en) 2005-08-05 2015-12-22 University Of Massachusetts Virus-like particles as vaccines for paramyxovirus
WO2007053850A2 (en) 2005-11-01 2007-05-10 Osteotech, Inc. Bone matrix compositions and methods
JP2007332106A (ja) * 2006-06-16 2007-12-27 Okayama Univ 骨形成用徐放性医薬組成物
US20080206299A1 (en) * 2007-02-27 2008-08-28 Shimp Lawrence A Method for Recovering Minerals From Bone and Use of Same
WO2008157492A2 (en) 2007-06-15 2008-12-24 Osteotech, Inc. Osteoinductive demineralized cancellous bone
US9554920B2 (en) 2007-06-15 2017-01-31 Warsaw Orthopedic, Inc. Bone matrix compositions having nanoscale textured surfaces
CA2690457C (en) 2007-06-15 2018-02-20 Osteotech, Inc. Bone matrix compositions and methods
US9492278B2 (en) 2007-07-10 2016-11-15 Warsaw Orthopedic, Inc. Delivery system
JP2009045142A (ja) * 2007-08-16 2009-03-05 Okayama Univ 生体内にて基材周囲に骨形成を誘導するための基材処理方法
WO2010039224A2 (en) 2008-09-30 2010-04-08 University Of Massachusetts Medical School Respiratory syncytial virus (rsv) sequences for protein expression and vaccines
JP5799409B2 (ja) * 2008-12-19 2015-10-28 国立大学法人 新潟大学 ヘパリン親和性エリスロポエチン
US9011537B2 (en) 2009-02-12 2015-04-21 Warsaw Orthopedic, Inc. Delivery system cartridge
GB201601136D0 (en) 2016-01-21 2016-03-09 Mörgelin Matthias And Abdillahi Suado M Novel polypeptides and medical uses thereof
US10919948B2 (en) 2016-12-30 2021-02-16 Biogend Therapeutics Co., Ltd. Recombinant polypeptides, compositions, and methods thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996039430A1 (en) * 1995-06-06 1996-12-12 Hall Frederick L TGF-β FUSION PROTEINS AND THEIR USE IN WOUND HEALING
DE19548476A1 (de) * 1995-12-22 1997-06-26 Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh Zielgerichtete Verbindungen mit knorpel- und/oder knocheninduzierender Aktivität

Family Cites Families (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4455256A (en) 1981-05-05 1984-06-19 The Regents Of The University Of California Bone morphogenetic protein
US4804744A (en) 1984-01-04 1989-02-14 International Genetic Engineering, Inc. Osteogenic factors
NZ210699A (en) 1984-01-04 1989-06-28 Int Genetic Eng Isolation of an osteogenic protein of the p3 immunologically related family
US4627982A (en) 1984-07-16 1986-12-09 Collagen Corporation Partially purified bone-inducing factor
US4877864A (en) 1987-03-26 1989-10-31 Genetics Institute, Inc. Osteoinductive factors
US5459047A (en) 1986-07-01 1995-10-17 Genetics Institute, Inc. BMP-6 proteins
US5013649A (en) 1986-07-01 1991-05-07 Genetics Institute, Inc. DNA sequences encoding osteoinductive products
US6150328A (en) 1986-07-01 2000-11-21 Genetics Institute, Inc. BMP products
US5187076A (en) 1986-07-01 1993-02-16 Genetics Institute, Inc. DNA sequences encoding BMP-6 proteins
US5631142A (en) 1986-07-01 1997-05-20 Genetics Institute, Inc. Compositions comprising bone morphogenetic protein-2 (BMP-2)
IL83003A (en) 1986-07-01 1995-07-31 Genetics Inst Factors that soak bone formation
US5366875A (en) 1986-07-01 1994-11-22 Genetics Institute, Inc. Methods for producing BMP-7 proteins
ZA874681B (en) 1986-07-01 1988-04-27 Genetics Inst Novel osteoinductive factors
US5106748A (en) 1986-07-01 1992-04-21 Genetics Institute, Inc. Dna sequences encoding 5 proteins
US5250302A (en) 1988-04-08 1993-10-05 Stryker Corporation Osteogenic devices
US5258494A (en) 1988-04-08 1993-11-02 Stryker Corporation Osteogenic proteins
US4975526A (en) 1989-02-23 1990-12-04 Creative Biomolecules, Inc. Bone collagen matrix for zenogenic implants
US5011691A (en) 1988-08-15 1991-04-30 Stryker Corporation Osteogenic devices
US4968590A (en) 1988-04-08 1990-11-06 Stryker Corporation Osteogenic proteins and polypeptides
ATE142644T1 (de) 1988-04-08 1996-09-15 Stryker Corp Biosynthetische osteogene proteine und sie enthaltende osteogene vorrichtungen
US5266683A (en) 1988-04-08 1993-11-30 Stryker Corporation Osteogenic proteins
US5354557A (en) 1988-04-08 1994-10-11 Stryker Corporation Osteogenic devices
US5344654A (en) 1988-04-08 1994-09-06 Stryker Corporation Prosthetic devices having enhanced osteogenic properties
US5324819A (en) 1988-04-08 1994-06-28 Stryker Corporation Osteogenic proteins
US4967737A (en) 1988-08-03 1990-11-06 Osteg Dyne Inc. Method and device for treating bone disorders characterized by low bone mass
US5106626A (en) 1988-10-11 1992-04-21 International Genetic Engineering, Inc. Osteogenic factors
US5510418A (en) 1988-11-21 1996-04-23 Collagen Corporation Glycosaminoglycan-synthetic polymer conjugates
US4928959A (en) 1988-12-16 1990-05-29 Osteo-Dyne, Inc. Method and device for providing active exercise treatment for a patient suffering from a bone disorder
EP0384731B1 (de) 1989-02-23 1996-12-18 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Osteogenische Wachstumfaktoren, die aus sich regenerierendem Knochenmark identifiziert werden
EP0414915B1 (de) 1989-03-06 1996-06-12 Suntory Limited Neue superoxyd-dismutase
CA2030518C (en) 1989-03-28 2000-03-21 Elizabeth A. Wang Osteoinductive compositions
US5061786A (en) 1989-05-25 1991-10-29 Genentech, Inc. Biologically active polypeptides based on transforming growth factor-β
CA2020729A1 (en) 1989-07-19 1991-01-20 Michael C. Kiefer Bone morphogenetic protein
US5194596A (en) * 1989-07-27 1993-03-16 California Biotechnology Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor
JP3045398B2 (ja) 1989-09-06 2000-05-29 武田薬品工業株式会社 蛋白質、ｄｎａおよびその用途
US5350836A (en) * 1989-10-12 1994-09-27 Ohio University Growth hormone antagonists
DK0448704T3 (da) 1989-10-17 1999-04-06 Stryker Corp Osteogene anordninger
GB8927546D0 (en) 1989-12-06 1990-02-07 Ciba Geigy Process for the production of biologically active tgf-beta
DE69132823T2 (de) 1990-05-16 2002-07-18 Genetics Inst Knochen- und knorpel-bildung hervorrufende proteine
US5168050A (en) 1990-05-24 1992-12-01 Genentech, Inc. Mammalian expression of the bone morphogenetic protein-2b using bmp2a/bmp2b fusion
US5645591A (en) 1990-05-29 1997-07-08 Stryker Corporation Synthetic bone matrix
US5364839A (en) 1990-06-18 1994-11-15 Genetics Institute, Inc. Osteoinductive pharmaceutical formulations
ES2120964T3 (es) 1990-10-18 1998-11-16 Stryker Corp Peptidos osteogenicos.
WO1992009697A1 (en) 1990-11-30 1992-06-11 Celtrix Laboratories, Inc. USE OF A BONE MORPHOGENETIC PROTEIN IN SYNERGISTIC COMBINATION WITH TGF-β FOR BONE REPAIR
US5652118A (en) 1991-03-11 1997-07-29 Creative Biomolecules, Inc. Nucleic acid encoding a novel morphogenic protein, OP-3
ATE203166T1 (de) 1991-03-11 2001-08-15 Curis Inc Protein-induzierende morphogenese
US6395883B1 (en) 1991-03-11 2002-05-28 Curis, Inc. Soluble morphogenic protein complex compositions of matter
US5318898A (en) 1991-04-02 1994-06-07 Genetics Institute, Inc. Production of recombinant bone-inducing proteins
ATE142460T1 (de) 1991-06-21 1996-09-15 Genetics Inst Osteogene proteine enthaltende arzneimittel
JP3504263B2 (ja) 1991-11-04 2004-03-08 ジェネティックス・インスチチュート・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 組み換え型骨形態形成蛋白ヘテロダイマー、組成物および使用法
US6120760A (en) 1992-02-12 2000-09-19 Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Growth/differentiation factors of the TGF-β family
ES2141761T3 (es) 1992-02-12 2000-04-01 Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh Secuencias de dna codificantes de nuevos factores de crecimiento/diferenciacion.
US6180602B1 (en) 1992-08-04 2001-01-30 Sagami Chemical Research Center Human novel cDNA, TGF-beta superfamily protein encoded thereby and the use of immunosuppressive agent
JP3645258B2 (ja) 1993-01-12 2005-05-11 ジョーンズ ホプキンス ユニバーシティー スクール オブ メディシン 増殖分化因子−５
IL104954A (en) 1993-03-04 2006-08-01 Yissum Res Dev Co Use of osteogenic oligopeptides in the preparation of pharmaceutical compositions for the treatment of bone diseases and some such novel oligopeptides, pharmaceutical compositions containing them and their preparation
IL108947A0 (en) 1993-03-12 1994-06-24 Osteopharm Ltd Bone stimulating factor
US5652332A (en) * 1993-03-12 1997-07-29 Xoma Biologically active peptides from functional domains of bactericidal/permeability-increasing protein and uses thereof
EP1333035A3 (de) 1993-03-19 2004-07-07 The Johns Hopkins University School Of Medicine Wachstumsdifferenzierungsfaktor-8
US5637480A (en) 1993-05-12 1997-06-10 Genetics Institute, Inc. DNA molecules encoding bone morphogenetic protein-10
CA2165776A1 (en) 1993-07-09 1995-01-19 Se-Jin Lee Growth differentiation factor-6
IL110589A0 (en) 1993-08-10 1994-11-11 Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh Growth/differentiation factor of the TGF- beta family
US5385887A (en) 1993-09-10 1995-01-31 Genetics Institute, Inc. Formulations for delivery of osteogenic proteins
US5399677A (en) 1993-12-07 1995-03-21 Genetics Institute, Inc. Mutants of bone morphogenetic proteins
TW440566B (en) 1994-07-25 2001-06-16 Novartis Ag Novel process for the production of biologically active dimeric protein
US5707962A (en) 1994-09-28 1998-01-13 Gensci Regeneration Sciences Inc. Compositions with enhanced osteogenic potential, method for making the same and therapeutic uses thereof
US6180606B1 (en) 1994-09-28 2001-01-30 Gensci Orthobiologics, Inc. Compositions with enhanced osteogenic potential, methods for making the same and uses thereof
US5782919A (en) 1995-03-27 1998-07-21 Sdgi Holdings, Inc. Interbody fusion device and method for restoration of normal spinal anatomy
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5902785A (en) 1995-06-06 1999-05-11 Genetics Institute, Inc. Cartilage induction by bone morphogenetic proteins
ZA966489B (en) 1995-08-03 1997-02-26 Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh New protein human MP52 Arg.
JP2000506375A (ja) 1996-01-26 2000-05-30 エイチエスシー リサーチ アンド デベロップメント リミテッド パートナーシップ アルツハイマー病に関連する核酸およびタンパク質、ならびにその使用
US5877153A (en) * 1996-06-11 1999-03-02 Commonwealth Biotechnologies Inc. Heparin-binding peptides
DE69738331T2 (de) 1996-10-08 2008-10-16 University Of Washington, Seattle Therapeutische anwendungen von laminin und von proteinfragmenten die von laminin abgeleitet sind
US6080779A (en) 1996-12-13 2000-06-27 Osteoscreen, Inc. Compositions and methods for stimulating bone growth
US6894022B1 (en) * 1998-08-27 2005-05-17 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Growth factor modified protein matrices for tissue engineering
WO2001076532A2 (en) 2000-04-11 2001-10-18 Cogent Neuroscience, Inc. Compositions and methods for diagnosing and treating conditions, disorders, or diseases involving cell death

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996039430A1 (en) * 1995-06-06 1996-12-12 Hall Frederick L TGF-β FUSION PROTEINS AND THEIR USE IN WOUND HEALING
DE19548476A1 (de) * 1995-12-22 1997-06-26 Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh Zielgerichtete Verbindungen mit knorpel- und/oder knocheninduzierender Aktivität

Also Published As

Publication number Publication date
RU2227743C2 (ru) 2004-04-27
ATE470713T1 (de) 2010-06-15
DE50015938D1 (de) 2010-07-22
AU762387B2 (en) 2003-06-26
CN1340102A (zh) 2002-03-13
JP2009011323A (ja) 2009-01-22
JP2008086319A (ja) 2008-04-17
CN1169959C (zh) 2004-10-06
US7253254B1 (en) 2007-08-07
JP4155711B2 (ja) 2008-09-24
EP1151095B1 (de) 2010-06-09
WO2000047736A1 (de) 2000-08-17
CA2362496A1 (en) 2000-08-17
AU2110600A (en) 2000-08-29
JP2002536016A (ja) 2002-10-29
EP1151095A1 (de) 2001-11-07
CA2362496C (en) 2011-04-19
BR0008785A (pt) 2001-11-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE19906096A1 (de) Protein mit einem Heparin-bindenden Epitop
DE3752364T2 (de) Osteoinduktive Zusammensetzungen
DE69434538T2 (de) Vaskulärer endothelialer Wachstumsfaktor 2
Hofer et al. Brain-derived neurotrophic factor prevents neuronal death in vivo
DE69433742T2 (de) Bmp-10 zusammensetzungen
DE69737809T2 (de) Methoden zur herstellung von op-1 morphogen analoge
DE69233022T2 (de) Rekombinante knochenmorphogenetische protein heterodimere, zusammensetzungen und verfahren zur verwendung
EP0713529B1 (de) Wachstums-Differenzierungsfaktor der TGF-B Familie
US5141905A (en) Dna sequences encoding bmp-7 proteins
DE69434122T2 (de) Osteogenisches produkt und verwendung
US5459047A (en) BMP-6 proteins
DE60021388T2 (de) Monomeres protein der tgf-beta familie
DE69936312T2 (de) Mutanten von op-1
DE69533698T2 (de) Pantropische Neurotropische Faktoren
DE69435038T2 (de) Aktivin rezeptor-ähnliche kinase (alk), gehörend zur tgf rezeptorfamilie und/oder zur bmp rezeptorfamilie
DE60318026T2 (de) Hybrid-hepatozyten-wachstumsfaktorgen mit hoher expressionseffizienz von zwei hepatozyten-wachstumsfaktor-heterotypen
DE69133338T2 (de) Bmp-5-derivate
DE69637242T2 (de) Methode und zusammensetzungen zur identifizierung von morphogen-analogen
DE69735533T2 (de) Lösliche Polypeptide bestehend aus der ersten Coiled coil Domäne aus Mensch- und Maus-Epimorphin
DE69837265T2 (de) Polypeptide zur regenerierung des nervensystems
DE69534958T2 (de) Modifiziertes Epimorphin
DE69832880T2 (de) Frazzled nukleotidsequenzen, expressionsprodukte, zusammensetzungen und verwendungen
DE69634138T2 (de) HGF Mutant und dessen Verwendung als Antikrebsmittel
DE19628895A1 (de) Metallhaltige Ribonukleotidpolypeptide
DE19811047C1 (de) Metallhaltige Ribonukleotidpolypeptide

Legal Events

Date Code Title Description
OM8 Search report available as to paragraph 43 lit. 1 sentence 1 patent law
8110 Request for examination paragraph 44
8127 New person/name/address of the applicant

Owner name: OSTEOPHARMA INC., OSAKA, JP

8181 Inventor (new situation)

Inventor name: SEBALD, WALTER PROF. DR., 97074 WUERZBURG, DE

R002 Refusal decision in examination/registration proceedings
R003 Refusal decision now final

Effective date: 20121113