DE2830524A1 - Verfahren zur herstellung einer zellsuspension aus blut zur unterscheidung von weissen blutkoerperchen und blutplaettchen von anderen blutpartikeln - Google Patents
Verfahren zur herstellung einer zellsuspension aus blut zur unterscheidung von weissen blutkoerperchen und blutplaettchen von anderen blutpartikelnInfo
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Description
TECHNICON INSTRUMENTS CORPORATION, Tarrytown, N. Y. VStA
Verfahren zur Herstellung einer Zellsuspension aus Blut zur Unterscheidung von weißen Blutkörperchen
und Blutplättchen von anderen Blutpartikeln
Die bestehenden Verfahren zum Auszählen von Blutplättchen haben sich als nicht ganz verläßlich
erwiesen. Automatisierte Ausführungen dieser Verfahren haben sich bisher auf Chemismen gestützt, die zu
falsch bestimmten Blutplättchenzählungen geführt haben.
Bei typischen Verfahren zur Zählung von Blutplättchen wird ein Material zu einer Gesamtblutprobe
hinzugegeben, um die roten Blutkörperchen aufzulösen. Die Verfahren zum Auflösen der roten Blutkörperchen,
die bisher angewandt wurden, besitzen Jedoch schädliche Nebenwirkungen: Material von den Blutplättchen selbst
wird extrahiert, einige weiße Blutkörperchen werden zerteilt, und in einigen Fällen bilden sich Niederschläge
aus Proteinen. Wenn von diesen Vorgängen einer oder mehrere ,stattfinden, wird die angezeigte Plättchenzählung
falsch berechnet.
Was die Differentialzählungen für weiße Blutkörperchen, die gegenwärtig verfügbar sind, angeht,
so ist es bisher nicht möglich, weiße Blutkörperchen zu erhalten, die durch Auflösung frei von roten Blutkörperchen
sind, ohne daß die weißen Blutkörperchen gleichzeitig geschädigt werden. Daher ist eine angemessene
Differenzierung der Leukocyten, wie sie in der
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US-PS 3 741 875 beschrieben ist, nur möglich, wenn die Zellen durch cytochemische Umsetzung angefärbt werden.
Aufgabe der Erfindung ist es daher, die Unterscheidung der Blutplättchen von den Hüllen (ghosts) der
roten Blutkörperchen und den Leukocyten sowie Informationen
über die Größe der Blutplättchen zu gewinnen und die Unterscheidung der meisten Klassen der ungefärbten
Leukocyten aufgrund ihrer Größe und Granulareigenschaften
zu ermöglichen.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung einer Zellsuspension aus einer verdünnten
Blutprobe zur Unterscheidung der weißen Blutkörperchen und Blutplättchen von anderen Blutteilchen, das dadurch
gekennzeichnet ist, daß man
(a) eine gegen Koagulation geschützte Blutprobe mit einem Detergens versetzt, das die roten Blutkörperchen
für die anschließende Auflösung (Iyse) vorbehandelt,
ohne die Morphologie der weißen Blutkörperchen zu beeinträchtigen;
(b) dem Ganzen ein Fixiermittel zumischt, wobei das Gemisch bei neutralem pH-Wert gehalten wird;
und
(c) das Gemisch mindestens 2 min bei einer Temperatur im wesentlichen von 55 bis 62 0C bebrütet.
In einer bevorzugten Durchführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird als Detergens Polyoxyethylen-20-Sorbitanmonolaurat
verwendet und die Bebrütung 2 min bei etwa 58 0C durchgeführt.
In einer automatisierten Apparatur für kontinuierlichen Durchflußbetrieb, wie dem Hemalog D (Eingetragenes
Warenzeichen der Technicon Instruments Corporation), die der Erleichterung der differentiellen
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Zählung der weißen Blutkörperchen dient, und bei dem
automatisierten Verfahren gemäß US-PS 3 741 875 werden
die einzelnen Zellarten mit Hilfe von cytochemischen Verfahren speziell identifiziert und markiert. Der
Strom aus gefärbten und ungefärbten Zellen fließt durch eine optische Sichtkammer, in der ein fotoelektrisches
Meßverfahren die Amplituden des absorbierten Lichtes und getrennt davon das von jeder Zelle gestreute Licht
mißt. Elektronische Signale werden aufgrund ihrer Amplitude eingeteilt und zu Kategorien klassifiziert, die
den unterschiedlichen Zellarten entsprechen. Für die fünf hauptsächlichen Arten von weißen Blutkörperchen
von Gesamtblut werden die entsprechenden Daten für eine Probe/min ausgedruckt. Mit dem spezifischen Verfahren
zur chemischen Identifizierung werden die weißen Blutkörperchen angefärbt. Das gestreute Licht mißt die
durch das Verfahren beeinflußte Größe der Zellen grob.
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Erzielung einer different!eilen Zählung der weißen Blutkörperchen
läßt sich sowohl der manuellen als auch der automatisierten Durchführungsform anpassen. In jedem der
beiden Fälle ermöglicht das Verfahren eine wirksame Unterscheidung der meisten normalen KLassen ungefärbter
Leukocyten durch Lichtstreuung allein, da die Morphologie der weißen Blutkörperchen nicht beeinträchtigt
worden ist. Die Zählung ist genau, weil die vorbereiteten Zellen frei von Klumpen aus weißen Blutkörperchen,
Hüllen roter Blutkörperchen oder Blutplättchen sind.
Eine weit verbreitete Methode zur Zählung von Blutplättchen beruht auf der Verwendung einer konzentrierten
Harnstofflösung zur Auflösung der roten Blutkörperchen. Bei diesem Verfahren wird auch etwas Material
von Blutplättchen extrahiert, und es werden einige
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weiße Blutkörperchen zerteilt, wodurch Teilchen erzeugt
werden, die sich in den dabei verwendeten Instrumenten nicht von Blutplättchen unterscheiden lassen,
wodurch die Zählung der Blutplättchen falsch wird, und bei einigen abnormen Blutproben wird die Bildung
von sehr feinen Proteinnieder schlagen verursacht, die sich ebenfalls in den verwendeten Instrumenten von
Blutplättchen nicht unterscheiden lassen und wodurch ebenfalls in derartigen Blutproben die Zählung der
Blutplättchen beeinträchtigt wird.
Die Extraktion von Blutplättchenmaterial durch den Harnstoff erniedrigt das Lichtbrechungsvermögen der
Blutplättchen, wodurch die Größe des Signals des gestreuten Lichtes erniedrigt wird, das durch sie in den
verwendeten Instrumenten erzeugt wird. Demzufolge verschmelzen die kleinsten Signale, die von den Blutplättchen
ausgehen, mit den größten Rauschsignalen des Systems, die durch das elektronische Rauschen in den .
Detektoren und Verstärkern sowie von den gleichzeitig durch den fotometrischen LichtStreuungsdetektor erfolgenden
Durchtritt einer großen Anzahl von Zellhüllen von röten Blutkörperchen, d.h. Membranen von roten
Blutkörperchen, die von ihrem Inhalt durch die Auflösung oder Lyse befreit worden sind, erzeugt werden.
Es ist daher nicht möglich, eine Schwelle zwischen dem Rauschen und der durch die Blutplättchen hervorgerufenen
Anzeige mit großer Zuverlässigkeit genau festzusetzen.
Durch das erfindungsgemäße Verfahren wird eine Methode geschaffen, bei der die roten Blutkörperchen
aufgelöst werden, ohne daß Material von den Blutplättchen extrahiert wird, ohne daß die weißen Blutkörperchen
zerteilt werden und ohne daß sich aus den Proteinen abnormer Blutproben Niederschläge bilden. Das
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erfindungsgemäße Verfahren liefert eine Hochpulsverteilung (pulse-height distribution) von Signalen mit
einem großen, wohl definierten Minimum zwischen Rauschen und Blutplättchen sowie einem weiteren großen,
wohldefinierten Minimum zwischen Blutplättchen und weißen Blutkörperchen.
Außerdem bleiben bei dem erfindungsgeraäßen Verfahren
die Unterschiede in der Morphologie der weißen Blutkörperchen erhalten, wodurch die Unterscheidbarkeit
der meisten Klassen an weißen Blutkörperchen voneinander ohne Anfärbung ermöglicht wird.
Gleichgültig, ob das erfindungsgemäße Verfahren zur Erzielung einer differentiellen Zählung der weißen
Blutkörperchen oder einer Zählung der Blutplättchen eingesetzt wird, wird zunächst eine am Koagulieren
gehinderte Blutprobe mit einem Detergens versetzt, das die roten Blutkörperchen für die anschließende Auflösung
bzw. Lyse vorbehandelt.
Der Zusatz des Detergens zu diesem Zeitpunkt ist ein wichtiger Schritt des erfindungsgemäßen Verfahrens.
Das Detergens wirkt als Vorbehandlungsmittel oder Vorkonditionierungsmittel derart, daß es bei den
Konzentrationen, in denen es zugesetzt wird, die Morphologie der weißen Blutkörperchen oder der Blutplättchen
nicht beeinträchtigt und auch die roten Blutkörperchen nicht auflöst, indessen die roten Blutkörperchen für die anschließende Auflösung bzw. Lyse vorbereitet.
Für das erfindungsgemäße Verfahren wird als Detergens vorzugsweise Polyoxyethylen-20-Sorbitanmonolaurat
verwendet, wenngleich andere Detergentien, wie beispielsweise Polyoxyethylen-23-monaurylether
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oder Polyoxyethylen-20-Sorbitanmonooleat, ebenfalls
in der Lage sind, die roten Blutkörperchen vorzubehandeln, ohne daß die roten Blutkörperchen aufgelöst
werden, und daher in gleicher Weise verwendbar sind.
Die Konzentration des Detergens in dem erhaltenen Gemisch liegt zwischen etwa 0,03 und 2,0%
(Volumen/Volumen) und beträgt vorzugsweise etwa 0,4 bis etwa 0,6% (Volumen/Volumen).
Während des erwähnten Vorbehandlungsschrittes wird das erhaltene Gemisch bei Raumtemperatur oder
Umgebungstemperatur, beispielsweise bei etwa 25 0C,
etwa 1 min lang bebrütet· Dadurch wird ermöglicht,*L
daß das Detergens seine Aufgabe zufriedenstellend erfüllt.
Das bebrütete Gemisch wird unter Rühren und Halten des pH-Wertes im neutralen Bereich mit einem
Fixierungsmittel versetzt. Vorzugsweise ist das Fi- xierungsmittel eine mit Phosphat gepufferte Formaldehydlösung,
und der pH-Wert liegt im Bereich von 6 bis
Das Gemisch wird anschließend bei einer Temperatur von etwa 55 bis etwa 62 0C mindestens 2 min lang
und vorzugsweise bei 58 0C 2 min lang bebrütet.
Anschließend wird das Gemisch nötigenfalls verdünnt und optisch gemessen. Zur Bestimmung der Blutplättchenzahl
wird die Verdünnung mit einer angesäuerten isotonischen Salzlösung vorgenommen, wonach das
erhaltene Gemisch einen pH-Wert von 2 bis 4 besitzt. Eine Suspension unter Verwendung von mit 0,5% Essigsäure
angesäuerter Salzlösung ergibt eine hinreichende Verdünnung, ein verbessertes Verhältnis von Blutplättchensignal
zu Rauschen, eine saubere Abtrennung der
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Blutplättchen von den Hüllen der roten Blutkörperchen und Leukocyten, und die ursprünglichen einzelnen Volumina
der Blutplättchen bleiben erhalten. Es ist auch möglich und in manchen Fällen bevorzugt, die Probe
durch Zugabe einer isotonischen Salzlösung vor der Behandlung mit dem Detergens teilweise zu verdünnen.
Zur Bestimmung der weißen Blutkörperchen wird die Probe durch Zusatz einer isotonischen Salzlösung
mindestens teilweise nach der Bebrütungsstufe verdünnt. Alternativ kann die Probe mindestens teilweise
vor der Behandlung mit dem Detergens verdünnt werden.
Die Suspension von weißen Blutkörperchen, die auf die angegebene Weise mit einer isotonischen Salzlösung
verdünnt worden ist, erhält die Morphologie der weißen Blutkörperchen, erlaubt eine Unterscheidung
der ungefärbten weißen Blutkörperchen durch Lichtstreuung mit niedrigem und großem Winkel sowie die
Unterscheidung von Lymphocyten, Monocyten, Neutrophilen und Eosinophilen ohne Anfärbung.
Das Verfahren erhält außerdem die Peroxidaseaktivität
der weißen Blutkörperchen, was die weitere Unterscheidung der beiden sonst schwierig zu unterscheidenden
Gruppen von Leukocyten ermöglicht, nämlich die der peroxydaseaktiven und -inaktiven Agranulocyten,
Die hergestellte Suspension kann sofort (on line) für die klinisch-hämatologische Analyse durch Lichtstreuung
verwendet werden, und sie kann aufbewahrt werden, um als Bezugssuspension für ein derartiges System
zu dienen.
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Beispiel 1
Macro-Methode
0,1 ml einer am Koagulieren gehinderten Gesamtblutprobe
werden mit 0,32 ml einer 1%igen Lösung von Polyoxyethylen-20-Sorbitanmonolaurat in isotonischer
Salzlösung versetzt und das erhaltene Gemisch bei Raumtemperatur etwa 1 min lang bebrütet.
Danach wird das Gemisch unter Rühren mit 0,42 ml phosphatgepufferter Formaldehydlösung mit einem Gehalt
von 8 VoI ♦ -#» Formaldehyd versetzt und das erhaltene Gemisch
2 min bei 57 0C bebrütet.
A. Bestimmung der weißen Blutkörperchen
Das obige bebrütete Gemisch wurde mit 1,2 ml isotonischer Salzlösung versetzt, und die differentiel-Ie
Zählung der weißen Blutkörperchen wurde durch Lichtstreuung durchgeführt.
B. Bestimmung der Blutplättchen
Das oben erwähnte bebrütete Gemisch wurde mit 1,2 ml isotonischer Salzlösung versetzt. 0,1 ml des
erhaltenen Gemisches wurde zu 4,0 ml einer mit 0,5% Essigsäure angesäuerten isotonischen Salzlösung hinzugefügt.
Die Zählung der Blutplättchen und die Messung der Größe wurden mit Hilfe der Lichtstreuung durchgeführt.
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0,01 ml vor dem Koagulieren geschütztes Gesamtkapillarblut
wurden im Verhältnis von 1:10 mit einer isotonischen Salzlösung verdünnt, und 0,1 ml des erhaltenen
Gemisches wurden zu 0,32 ml einer O,125?6igen Lösung
von Polyoxyethylen-20-Sorbitanmonolaurat in isotonischer
Salzlösung hxnzugegeben und das erhaltene Gemisch etwa 1 min bei Raumtemperatur bebrütet.
Das Gemisch wurde danach unter Rühren mit 0,42 ml einer phosphatgepufferten Formaldehydlösung mit einem
Gehalt von 8 Vol.-% Formaldehyd versetzt und das erhaltene
Gemisch bei 57 0C 2 min lang bebrütet.
A. Bestimmung der weißen Blutkörperchen
Die differentielle Zählung der weißen Blutkörperchen
der obigen Suspension wurde durch Lichtstreuung gemessen.
B. Bestimmung der Blutplättchen
Das obige bebrütete Gemisch wurde mit 1,2 ml isotonischer Salzlösung versetzt. 0,1 ml des erhaltenen
Gemisches wurden zu 1,0 ml einer mit 0,5% Essigsäure angesäuerter isotonischer Salzlösung hinzugefügt. Die Zählung
der Blutplättchen und die Bestimmung der Größe erfolgten durch Lichtstreuung.
80988S/0812
Claims (11)
- Paienfcnraolfe 9°29Dipi-tog. Woligimg Hoiöiisl6 Franken a. M. 1
Paiksiiaß© 13TECHNICON INSTRUMENTS CORPORATION, Tarrytown, N.Y. VStAPatentansprücheVerfahren zur Herstellung einer Zeil suspension aus einer verdünnten Blutprobe zur Unterscheidung von weißen Blutkörperchen und Blutplättchen von anderen Blutteilchen,dadurch gekennzeichnet, daß man(a) eine am Koagulieren gehinderte Blutprobe mit einem Detergens versetzt, das die roten Blutkörperchen für die anschließende Auflösung (Lyse) vorbehandelt, ohne die Morphologie der weißen Blutkörperchen zu beeinträchtigen;(b) ein Fixiermittel unter Aufrechterhaltung des neutralen pH-Wertes des Gemisches zumischt und(c) das erhaltene Gemisch bei einer Temperatur von 55 bis 62 0C mindestens 2 min bebrütet. - 2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Detergens Polyoxyethylen-20-Sorbitanmonolaurat in einer Menge verwendet, daß eine Konzentration in dem Gemisch von 0,3 bis 2,0% (Volumen/Volumen) erhalten wird.
- 3. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in der Stufe (a) die mit dem Detergens versetzte Blutprobe etwa 1 min bei Raumtemperatur inkubiert.809885/0812ORIGINAL INSPECTED
- 4. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man das Gemisch in Stufe (b) nach dem Zusatz des Fixiermittels bei einem pH-Wert von 6 bis 8 hält.
- 5. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Fixiermittel eine phosphatgepufferte Formaldehydlösung verwendet.
- 6. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Temperatur in Stufe (c) bei etwa 58 0C und die Inkubationszeit bei 2 min hält.
- 7. Verfahren gemäß Anspruch 1 zur Bestimmung von weißen Blutkörperchen,dadurch gekennzeichnet, daß man die Verdünnung der Probe mindestens teilweise nach der Bebrütungsstufe (c) unter Verwendung einer isotonischen Salzlösung durchführt, wobei man für das erhaltene Gemisch einen pH-Wert von 6 bis 8,5 wählt.
- 8. Verfahren gemäß Anspruch 1 zur Bestimmung von weißen Blutkörperchen,dadurch gekennzeichnet, daß man die Verdünnung der Probe mindestens teilweise vor der Behandlung mit dem Detergens in Stufe (a) durchführt.809885/0812
- 9. Verfahren gemäß Anspruch 1 zur Bestimmung von Blutplättchen,dadurch gekennzeichnet, daß man die Verdünnung der Probe nach der Bebrütungsstufe (c) unter Verwendung einer angesäuerten isotonischen Salzlösung durchführt und für das erhaltene Gemisch einen pH-Wert von 2 bis 4 wählt.
- 10. Verfahren gemäß Anspruch 9,
dadurch gekennzeichnet, daß man die isotonische Salzlösung mit Essigsäure ansäuert. - 11. Verfahren gemäß Anspruch 9,
dadurch gekennzeichnet, daß man die Verdünnung der Probe teilweise durch Zusatz der isotonischen Salzlösung vor der Behandlung mit dem Detergens in Stufe (a) durchführt.8ö988S/oei2
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ATE390T1 (de) * | 1978-11-01 | 1981-11-15 | Contraves Ag | Verfahren zur verminderung der stoerung einer photometrischen messung durch lichtstreuung in einer zu messenden suspension und reagenz zur durchfuehrung des verfahrens. |
US4284412A (en) * | 1979-07-13 | 1981-08-18 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method and apparatus for automated identification and enumeration of specified blood cell subclasses |
US5045472A (en) * | 1981-06-26 | 1991-09-03 | Technicon Instruments Corporation | Reagent mixture and composition for treating red blood cells to effect sphering |
US4465774A (en) * | 1981-07-16 | 1984-08-14 | Sherwood Medical Company | Standard or control material for glysocylated or total hemoglobin determination |
US4528274A (en) * | 1982-07-06 | 1985-07-09 | Coulter Electronics, Inc. | Multi-purpose blood diluent and lysing agent for differential determination of lymphoid-myeloid population of leukocytes |
US4637986A (en) * | 1983-08-22 | 1987-01-20 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Flow cytometry lysing reagent with leukoprotective agent for producing a 3-part WBC count |
US4704364A (en) * | 1984-05-18 | 1987-11-03 | Coulter Electronics, Inc. | Hematology control compositions for three populations of leukocytes; and methods for their preparation and use in whole blood control systems |
US4751179A (en) * | 1984-05-31 | 1988-06-14 | Coulter Electronics, Inc. | Method and reagents for differential determination of four populations of leukocytes in blood |
WO1985005640A1 (en) * | 1984-05-31 | 1985-12-19 | Coulter Electronics, Inc. | A reagent system and method for identification, enumeration and examination of classes and subclasses of blood leukocytes |
US4745071A (en) * | 1985-09-05 | 1988-05-17 | Sequoia-Turner Corporation | Method for the volumetric differentiation of blood cells types |
US4978624A (en) * | 1985-09-06 | 1990-12-18 | Technicon Instruments Corporation | Reagent for the determination of a differential white blood cell count |
US4801549A (en) * | 1985-09-06 | 1989-01-31 | Technicon Instruments Corporation | Method for the determination of a differential white blood cell count |
JPS62242854A (ja) * | 1986-04-15 | 1987-10-23 | Kyoto Ikagaku Kenkyusho:Kk | 血液の血小板凝集阻止方法 |
JPH06100596B2 (ja) * | 1986-09-10 | 1994-12-12 | 東亜医用電子株式会社 | フロ−サイトメトリ−による白血球の分類方法 |
US5155044A (en) * | 1987-03-13 | 1992-10-13 | Coulter Electronics, Inc. | Lysing reagent system for isolation, identification and/or analysis of leukocytes from whole blood samples |
IL85532A (en) * | 1987-03-13 | 1992-03-29 | Coulter Electronics | Method and lytic reagent system for isolation,identification and/or analysis of leukocytes from whole blood samples |
US5045474A (en) * | 1987-05-28 | 1991-09-03 | Sequoia-Turner Corporation (Unipath) | Semi-automatic process for white cell differential count |
US5389549A (en) * | 1987-05-29 | 1995-02-14 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Method for classifying leukocytes and a reagent used therefor |
EP0316453B1 (de) * | 1987-05-29 | 1996-03-27 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Verfahren zum klassifizieren von leukozyten und reagenzien |
JP2619900B2 (ja) * | 1988-01-27 | 1997-06-11 | 東亜医用電子株式会社 | 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬および方法 |
US5008202A (en) * | 1988-11-29 | 1991-04-16 | Sequoia Turner Corporation | Blood diluent for red blood cell analysis |
CA2016699C (en) * | 1989-05-15 | 2003-11-18 | Paul N. Marshall | Lytic agents and uses thereof |
US5284940A (en) * | 1990-11-14 | 1994-02-08 | Hri Research, Inc. | Preparation for nucleic acid samples |
US5654179A (en) * | 1990-11-14 | 1997-08-05 | Hri Research, Inc. | Nucleic acid preparation methods |
US5620852A (en) * | 1990-11-14 | 1997-04-15 | Hri Research, Inc. | Nucleic acid preparation methods |
US5460797A (en) * | 1991-05-08 | 1995-10-24 | Streck Laboratories, Inc. | Method for fixing tissues and cells for analysis using oxazolidine compounds |
US5459073A (en) * | 1991-05-08 | 1995-10-17 | Streck Laboratories, Inc. | Method and composition for preserving antigens and process for utilizing cytological material produced by same |
US5849517A (en) * | 1991-05-08 | 1998-12-15 | Streck Laboratories, Inc. | Method and composition for preserving antigens and nucleic acids and process for utilizing cytological material produced by same |
WO1992019966A1 (en) * | 1991-05-09 | 1992-11-12 | Streck Laboratories, Inc. | White blood cell hematology control |
US5270208A (en) * | 1991-05-09 | 1993-12-14 | Streck Laboratories, Inc. | White blood cell hematology control |
US5262327A (en) * | 1991-05-09 | 1993-11-16 | Streck Laboratories, Inc. | White blood cell hematology control |
US6509192B1 (en) * | 1992-02-24 | 2003-01-21 | Coulter International Corp. | Quality control method |
JP3301646B2 (ja) | 1993-03-19 | 2002-07-15 | シスメックス株式会社 | 幼若細胞測定用試薬 |
US5639630A (en) * | 1995-05-16 | 1997-06-17 | Bayer Corporation | Method and reagent composition for performing leukocyte differential counts on fresh and aged whole blood samples, based on intrinsic peroxidase activity of leukocytes |
US6221668B1 (en) | 1999-08-20 | 2001-04-24 | Streck Laboratories, Inc. | Hematology control and system for multi-parameter hematology measurements |
US6200500B1 (en) | 1999-08-20 | 2001-03-13 | Streck Laboratories, Inc. | Hematology control and system for multi-parameter hematology measurements |
US6514763B2 (en) | 2000-04-28 | 2003-02-04 | Hematronix, Inc. | Hematology blood control and method for preparation of same |
US6759246B1 (en) | 2001-11-30 | 2004-07-06 | Research & Diagnostic Systems, Inc. | Hematology control composition including lymphocyte analogs and method for preparation and use |
US6653137B2 (en) | 2001-12-03 | 2003-11-25 | Streck Laboratories Inc. | Hematology reference control |
US6723563B2 (en) | 2001-12-03 | 2004-04-20 | Streck Laboratories Inc. | Hematology reference control |
JP5162177B2 (ja) * | 2007-07-31 | 2013-03-13 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置及び粒子分析方法 |
EP2525222A1 (de) | 2011-05-17 | 2012-11-21 | Markus M. Heiss | Anfängliche relative Lymphozytenzahl als vorhersagbarer Biomarker |
US11521401B2 (en) * | 2020-07-31 | 2022-12-06 | Bridging Biosciences, LLC | Fertility window prediction using a convolutional neural network (CNN) and other learning methods |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2153479A1 (de) * | 1970-10-30 | 1972-05-04 | Mount Sinai Research Foundation, New York, N.Y. (V.St.A.) | Verfahren und Vorrichtung zum differentiellen Zählen von weißen Blutzellen |
US3884579A (en) * | 1973-06-14 | 1975-05-20 | Cambridge Chemical Products In | Method for counting blood platelets |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4040785A (en) * | 1976-10-18 | 1977-08-09 | Technicon Instruments Corporation | Lysable blood preservative composition |
-
1977
- 1977-07-21 US US05/817,595 patent/US4099917A/en not_active Expired - Lifetime
-
1978
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2153479A1 (de) * | 1970-10-30 | 1972-05-04 | Mount Sinai Research Foundation, New York, N.Y. (V.St.A.) | Verfahren und Vorrichtung zum differentiellen Zählen von weißen Blutzellen |
US3741875A (en) * | 1970-10-30 | 1973-06-26 | Mount Sinai Res Foundation Inc | Process and apparatus for obtaining a differential white blood cell count |
US3884579A (en) * | 1973-06-14 | 1975-05-20 | Cambridge Chemical Products In | Method for counting blood platelets |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Advances in automated analysis, Technicon International Congress 1970, Vol. 1-Clinical: H. Ansley and L. Ornstein, Enzyme Histochemistry and Differential White Counts on the Technicon Hemalog D, S. 5 - 14 * |
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