DE2903131A1 - Hepatitis-safe prods. from citrate-stabilised plasma - by treating with ion exchange resins in the prepn. of anti:haemophilic globulin A, prothrombin complex, fibrinogen and a serum protein - Google Patents
Hepatitis-safe prods. from citrate-stabilised plasma - by treating with ion exchange resins in the prepn. of anti:haemophilic globulin A, prothrombin complex, fibrinogen and a serum proteinInfo
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Abstract
Description
Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin AProcess for the production of an antihemophilic globulin A.
enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin-Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen (Zusatz zu P 24 59 291.4-41) Im Hauptpatent (P (P 24 59 291.4-41) ist ein Verfahren zur Herstelleung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin-Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen beschrieben, bei dem als Ausgangsmaterial ein gefrorenes lonenaustauscherplasma verwendet wird, das bei Temperaturen von 2 bis 80C wieder aufgestaut wird und aus dem die überstehende Plasmaflüssigkeit von dem Faktor-1II-enthaltenden Proteinniederschlag abgetrennt und dieses Kryoprazipitat in an sich bebekannter Weise zu einem Faktor-VIII-Konzentrat aufgearbeitet wird während die Plasmaflüssigkeit durch Adsorption über handelsüblichem Tricalciumphosphat von den Faktoren II, VIID IX und X befreit wird, und anschließend aus der Plasmaflüssigkeit über kolloidaler Kieselsäure mit einer spezifischen Oberfläche von 50 bis 400 m2 /g die noch im Plasma vorliegenden Gerinnungsfaktoren und andere unstabile Proteine adsorbiert werden und eine Lösung von lagerstabilen Serumproteinen zurückbleibt Bei diesem Verfahren des Hauptpatents wurde als Ausgangsmaterial ein gefrorenes Ionenaustauscher,plasma verwendet, das durch direkte Entnahme von Spender-Venenblut über einen Polystyrol/Sulfonat-Kationenaustauscher und Einfrieren auf etwa -400C innerhalb etwa 48 Stunden gewonnen worden war.containing concentrate in addition to a prothrombin complex and a Solution of storage-stable serum proteins (addition to P 24 59 291.4-41) in the main patent (P (P 24 59 291.4-41) is a process for the preparation of an antihemophilic globulin A containing concentrate in addition to a prothrombin complex and a solution of storage-stable serum proteins described with the starting material a frozen Ion exchange plasma is used, which again at temperatures of 2 to 80C is dammed up and from which the supernatant plasma liquid from the factor 1II-containing Protein precipitate is separated and this cryoprecipitate is known per se Way is worked up to a factor VIII concentrate while the plasma fluid by adsorption on commercially available tricalcium phosphate from factors II, VIID IX and X is released, and then from the plasma liquid via colloidal Silicic acid with a specific surface area of 50 to 400 m2 / g which is still in the plasma present coagulation factors and other unstable proteins are adsorbed and a solution of storage-stable serum proteins remains at This process of the main patent was a frozen ion exchanger, plasma, as the starting material is used by direct collection of donor venous blood via a polystyrene / sulfonate cation exchanger and freezing to about -400C was obtained within about 48 hours.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß als Ionenaustauscherplasma im Verfahren des Hauptpatents auch ein übliches eingefrorenes Citratplasma verwendet werden kann, wenn man nach dem Auftauen und Abtrennen des Kryoprazipitates den über stand mit Anionenaustauscherharzen auf Basis Polystyrol/ Divinylbenzolquartäres Amin und Kationenaustauscherharzen auf Basis Polystyrol/Sulfonat behandelt. Da übliches Citratplasma jederzeit in ausreichender Menge zur Verfügung steht, läßt sich das Verfahren des Hauptpatents nunmehr jederzeit unabhängig von der Entnahme von Spenderblut durchführen.Surprisingly, it has now been found that the ion exchange plasma a conventional frozen citrate plasma is also used in the process of the main patent can be, if after thawing and separating the cryoprecipitate the over stood with anion exchange resins based on polystyrene / divinylbenzene quaternary Amine and cation exchange resins based on polystyrene / sulfonate treated. As usual Citrated plasma is always available in sufficient quantities, this can be done Process of the main patent now at any time regardless of the withdrawal of donated blood carry out.
Bekanntlich wird Blut üblicherweise in citrathaltigen Stabilisatoren abgenommen, wobei durch Komplexbindung des Blutcalciums mit dem Citrat die Gerinnung des Blutes verhindert wird, da bekanntermaßen für den Ablauf des Gerinnungsvorganges freie CalciumJIonen vorhanden sein müssen. Calcium gehört daher zu den Gerinnungsfaktoren und wird auch als Gerinnungsfaktor IV bezeichnet. Durch die erfindungsgemäße Zugabe von Ionenaustauschern zu dem mit Citrat stabilisierten Plasma kann das Citrat an den Anionenaustauscher gebunden werden, wodurch Calcium-Ionen wieder freigesetzt werden und für den Ablauf des Gerinnungsgeschehens wieder zur Verfügung stehen.It is well known that blood is usually contained in citrate-containing stabilizers decreased, with the coagulation by complex binding of the blood calcium with the citrate of the blood is prevented, as is known for the coagulation process free calcium ions must be present. Calcium is therefore one of the coagulation factors and is also known as coagulation factor IV. By adding according to the invention from ion exchangers to the plasma stabilized with citrate, the citrate can bound to the anion exchanger, releasing calcium ions again and are available again for the coagulation process to take place.
Die Calciumionen des mit Citrat stabilisierten Plasmas können erfindungsgemäß durch Zugabe eines Xationenaustaus chers gegen Natrium- oder Wasserstoff-Ionen ausgetauscht werden Wird im Anschluß an diesen Austausch das Citrat erfindungsgemäß mit einem Anionenaustatjcher gegen Chlorid- oder Hydroxyl-Ionen ausgetauscht, so wird überraschenderweise der gleiche Effekt der Stabilisierung des Plasmas erreicht wie dEr, den man erhält, wenn Calcium dem Blut direkt bei der Blutabnahme mit einem Kationenaustauscher entzogen und gegen Wasserstoff-oder Natrium-Ionen ausgetauscht wird. Der Austausch der Calcium-Ionen und Citrationen eines Citratplasmas kann auch in einem Schritt unter Verwendung eines sogenannten Mischbettes (Mischung aus Kationen- und Anionenaustauscher) erfolgen. Durch diesen Austausch der Calcium und Citrat-Ionen gegen Wasserstoff- und Hydroxyl-Ionen oder auch Natrium-und Chlorid-Ionen wird es erfindungsgemäß möglich, aus einem Citratplasma ein Ionenaustauscherplasma herzustellen, aus dem sich sodann die gleichen drei therapeutisch anwendbaren Produkte wie nach dem Hauptpatent und gegebenenfalls noch als viertes Produkt Fibrinogen herstellen lassen.The calcium ions of the plasma stabilized with citrate can according to the invention exchanged for sodium or hydrogen ions by adding a cation exchanger will be in Following this exchange, the citrate according to the invention exchanged for chloride or hydroxyl ions with an anion exchanger, see above the same effect of stabilizing the plasma is surprisingly achieved like the one that is obtained when calcium is added to the blood directly when the blood is drawn with a Removed cation exchanger and exchanged for hydrogen or sodium ions will. The exchange of calcium ions and citrate ions of a citrate plasma can also in one step using a so-called mixed bed (mixture of cation and anion exchanger). Through this exchange of calcium and citrate ions against hydrogen and hydroxyl ions or even sodium and chloride ions it will possible according to the invention to produce an ion exchange plasma from a citrate plasma, which then results in the same three therapeutically applicable products as after the main patent and possibly also produce fibrinogen as a fourth product permit.
Im erfindungsgemäßen Verfahren werden daher aus einem mit Citrat stabilisierten Blutplasma unter Vermeidung des Gerinnungsvorganges drei oder vier hepatitissichere und therapeutisch anwendbare Produkte erhalten. Die vier Produkte ßinda 1 Antihämophiles Globulin A 2. Prothrombinkomplex (Gerinnungsfaktoren II, VII, IX und X) 3. Lösung lagerstabiler Serumproteine 4. Fibrinogen Die Gerinnungsfaktoren II, VII, IX und X werden bekanntlich auch als PPSB-Faktoren bezeichnet gemäß folgender Bedeutung: P = Prothrombin (Faktor II) P = Proonvertin (Faktor VII) S = Stuart-Prower-Faktor (Faktor X) B = antihämophiles Globulin B (Faktor IX).In the process according to the invention, therefore, a citrate stabilized Blood plasma three or four hepatitis-safe while avoiding the coagulation process and receive therapeutically applicable products. The four products ßinda 1 Antihemophiles Globulin A 2. Prothrombin complex (coagulation factors II, VII, IX and X) 3. Solution storage-stable serum proteins 4. Fibrinogen The coagulation factors II, VII, IX and As is well known, X are also referred to as PPSB factors with the following meaning: P. = Prothrombin (factor II) P = Proonvertin (factor VII) S = Stuart Prower factor (Factor X) B = antihemophilic globulin B (factor IX).
Das verwendete Citratplasma soll vorzugsweise spätestens 48 Stunden nach der Blutabnahme bei etwa -40°C eingefroren werden. Diese Maßnahme dient dem Erhalt der Faktor VIII-Aktivität. Die Gewinnung von Kryopräzipitat aus diesem Citratplasma erfolgt in an sich bekannter Weise. Das vom Kryopräsipitat befreite Citratplasma wird bei Zimmertemperatur mit Kationenaustauschern auf Basis Polystyrol/Sulfonat und Anionenaustauschern auf Basis Polystyrol/Divinylbenzol/ quartäres Amin behandelt, wobei die überführung des Citratplasmas in Antionenaustauscherplasma im diskontånuierlichen ("batch") Verfahren oder durch Säulenchromatographie erfolgen kann.The citrated plasma used should preferably be 48 hours at the latest frozen at about -40 ° C after the blood sample has been drawn. This measure serves the Preservation of factor VIII activity. The recovery of cryoprecipitate from this citrated plasma takes place in a manner known per se. The citrated plasma freed from cryopreservation is at room temperature with cation exchangers based on polystyrene / sulfonate and anion exchangers based on polystyrene / divinylbenzene / quaternary amine treated, with the conversion of the citrate plasma into anti-ion exchange plasma in a discounted manner ("Batch") method or by column chromatography can be carried out.
Durch den Kationenaustauscher wird Calcium im Citratplasma entweder gegen Natrium- oder Wasserstoff-Ionen ausgetauscht.Through the cation exchanger, calcium in the citrate plasma is either exchanged for sodium or hydrogen ions.
Der Anionenaustauscher tauscht die Citrationen des Citratplasmas gegen Hydroxyl- oder Chlorid-Ionen aus. Der Austausch der Calcium-Ionen und Citrat-Ionen des Citratplasmas kann entweder nacheinander oder gleichzeitig im sogenannten Mischbettverfahren erfolgen.The anion exchanger exchanges the citrate ions in the citrate plasma for Hydroxyl or chloride ions. The exchange of calcium ions and citrate ions of the citrate plasma can either sequentially or simultaneously in the so-called mixed bed process take place.
Die verwendeten Kationenaustauscher auf Basis Polystyrol/ Sulfonat und Anionenaustauscher auf Basis PolystyrolDivinylbenzol/quartäres Amin werden nach Vorschrift der Harzherstell e"tweder die Natrium- und Chlorid- oder in die Wasserstoff- und Hydroxyl-Form gebracht, wobei bei der Umwandlung des Citratplasmas in Ionenaustauscherplasma im Mischbettverfahren die Harze in der Wasserstoff- bzw.The cation exchangers used are based on polystyrene / sulfonate and anion exchangers based on polystyrene-divinylbenzene / quaternary amine are Regulations of the resin manufacturers "either the sodium and chloride or the hydrogen and brought into the hydroxyl form, with the conversion of the citrate plasma into ion exchange plasma in the mixed bed process the resins in the hydrogen or
Hydroxyl-Form und bei aufeinanderfolgender Adsorption die Harze in der Natrium- bzw. Chlorid-Form verwendet werden. Die Adsorption Kann im Batch-Verfahren oder durch Chromatographie an geeigneten Chromatographierohren (Säulentechnik) erfolgen. Bei Anwendung der Ionenaustauscher im Mischbettverfahren kann das Mischungsverhältnis von Anionen- zu Kationenaustauscher variiert werden. In der Praxis hat sich ein Mischungsverhältnis von Kationen- zu Anionenaustauscher von 1:1,5 gut bewährt. Die Harze können auch in der Nat:ium-bzw. Chlorid-Form verwendet werden, was lediglich zu einer etwas höheren Natriumchloridionenkonzentration im Ionenaustauscherplasma führt.Hydroxyl form and, with successive adsorption, the resins in the sodium or chloride form can be used. Adsorption can be carried out in a batch process or by chromatography on suitable chromatography tubes (column technique). When using the ion exchanger in the mixed bed process, the mixing ratio can can be varied from anion to cation exchanger. In practice a Mixing ratio of cation to anion exchanger of 1: 1.5 has been tried and tested. the Resins can also be used in the Nat: ium or. Chloride form can be used what only to a somewhat higher sodium chloride ion concentration in the ion exchange plasma leads.
Die Ionenaustauscher können auch in Mischungen in der Wasserstoff-und Natrium-Form bzw. Hydroxyl- und Chlorid-Form vorliegen Das auf diese Weise hergestellte Ionenaustauscherplasma eignet sich zur Herstellung von Prothrombikomplex-Konzentrat und lagerstabilen Serumproteinen.The ion exchangers can also be in mixtures in the hydrogen and Sodium form or hydroxyl and chloride form are present The produced in this way Ion exchange plasma is suitable for the production of prothrombin complex concentrate and storage-stable serum proteins.
Zusätzlich wurde gefunden, daß die kolloidale Kieselsäure, die vorzugsweise eine spezifische Oberfläche von 50 bis 400 m2/g hat, und die die Aufgabe hat , noch im Plasma vorliegende Gerinnungsfaktoren und andere unstabile Proteine zu adsorbieren, ein geeignetes Ausgangsmaterial zur Gewinnung von Fibrinogen ist. Das bei dem erfindungsgemäßen Verfahren an die kolloidale Kieselsaure adsorbierte Fibrinogen läßt sich durch Kochsalz, vorzugsweise in Form einer 10%igen Kochsalzlösung, wieder von der kolloidalen Kieselsäure eluieren. Durch Dialyse und Ultrafiltration des Eluates läßt sich eine sterilfiltrierbare Fibrinogenlösung herstellen Das Fibrinogen kann durch Gefriertrocknung stabilisiert werden und ist nach Lösen mit sterilem Wasser für die therapeutische Anwendung geeignet. Dieses Verfahrens schema, das der der beigefügten Zeichnung gezeigt ist, und bei dem therapeutisch anwendbare Gerinnungstherapeutika und Humanserum gewonnen werden, hat gegenüber den im Hauptpatent aufgeführten Vorteilen den weiteren Vorteil, auch das üblicherweise bei Plasmapheresen und Blutspenden anfallende Citratblut verwenden zu können, indem der diesen Bluten und Plasmen anhaftende Nachteil des Stabilisatorzusatzes durch die Behandlung mit Ionenaustauschern wieder eliminiert wird.In addition, it was found that the colloidal silica, which is preferred has a specific surface area of 50 to 400 m2 / g, and which still has the task to adsorb coagulation factors and other unstable proteins present in the plasma, is a suitable starting material for the production of fibrinogen. That in the invention Fibrinogen adsorbed on the colloidal silica can be removed by salt, preferably in the form of a 10% saline solution, again from colloidal silica elute. A sterile filter can be obtained by dialysis and ultrafiltration of the eluate Preparing the fibrinogen solution The fibrinogen can be stabilized by freeze-drying and is suitable for therapeutic use after dissolving with sterile water. This process scheme, which is shown in the accompanying drawing, and at the therapeutically applicable coagulation therapeutics and human serum won has the additional advantage over the advantages listed in the main patent, also the citrated blood that usually accumulates during plasmapheresis and blood donation to be able to use, by the disadvantage of these bleeds and plasmas inherent in the The addition of stabilizers is eliminated again by treatment with ion exchangers will.
Die Erfindung wird durch die nachstehenden Beispiele näher erläutert: Beispiel 1 A) Herstellung von Ionenaustauscherplasma aus Citratplasma Neun Teile Spender-Venenblut wurden zu einem Teil einer 3,8%gen Natriumcitrat-Stabilisatorlösung gegeben. Das Blut wurde möglichst bald nach der Blutentnahme zentrifugiert und die in physiologischer Kochsalzlösung aufgeschlemmten Erythrozyten dem Spender reinfundiert. Das Plasma wurde spätestens innerhalb von 48 Stunden, vorzugsweise bei -400C, eingefroren.The invention is explained in more detail by the following examples: Example 1 A) Production of ion exchange plasma from citrated plasma Nine parts Donor venous blood became part of a 3.8% sodium citrate stabilizer solution given. The blood was centrifuged as soon as possible after the blood was drawn and the reinfused erythrocytes in physiological saline solution to the donor. The plasma was frozen within 48 hours at the latest, preferably at -400C.
Das gefrorene Plasma wurde bei einer Temperatur unter +4 0C aufgetaut. Es wurde im kontinuierlichen Fluß zentrifugiert.The frozen plasma was thawed at a temperature below +4 0C. It was centrifuged in continuous flow.
Die erhaltene Kälteausfällung (Kryopräzipitat) wurde nach der Arbeitsweise von Beispiel 1.A des Hauptpatents zu einem Faktor Vill-Konzentrat aufgearbeitet. Das Restplasma wurde mit den Kationen-und Anionenaustauschern behandelt und sodann der weiteren Fraktionierung zwecks Gewinnung des Prothrombinkomplex-Konzentrats, des Fibrinogens und der Lösung der lagerstabilen Serumproteine unterworfen.The cold precipitate obtained (cryoprecipitate) was according to the procedure of Example 1.A of the main patent worked up to a Factor Vill concentrate. The residual plasma was treated with the cation and anion exchangers and then further fractionation for the purpose of obtaining the prothrombin complex concentrate, of the fibrinogen and the solution of the storage-stable serum proteins.
Die Behandlung mit den Ionenaustauschern wurde einmal im Batch-Verfahren und mit einer anderen Probe im Chromatographieverfahren durchgeführt: A 1) Batch-Verfahren: Zu 1 000 ml Plasma wurden 75 ml eines Anionenaustauscr.erharzes auf Basis Polystyrol/Divinylbenzol/quartäres Amin in der Hydroxyl-Form gegeben. Nach Adsorption und Zentrifugation wurde die Adsorption noch zweimal mit dem regenerierten Anionenaustauscher wiederholt. Dann wurde die Citratkonzentration des adsorbierten Plasmas bestimmt.The treatment with the ion exchangers was once in the Batch process and performed with another sample in the chromatography process: A 1) Batch process: 75 ml of an anion exchange resin based on polystyrene / divinylbenzene / quaternary were added to 1,000 ml of plasma Amine given in the hydroxyl form. After adsorption and centrifugation, the Adsorption repeated twice with the regenerated anion exchanger. then the citrate concentration of the adsorbed plasma was determined.
A 2) Chromatographie-Verfahren: eines Ein Chromatographierohr wurde mit 75 ml/Anionenaustauscherharzes auf der Basis Polystyrol/Divinylbenzol/ quartäres Amin in der Hydroxyl-Form gefüllt. Über die Säule wurde 1 1 Citratplasma gegeben. Es wurden jeweils 100 ml Fraktionen gesammelt und die Citratkonzentration in den Fraktionen bestimmt.A 2) Chromatography Method: A chromatography tube was used with 75 ml / anion exchange resin based on polystyrene / divinylbenzene / quaternary Amine filled in the hydroxyl form. 1 l of citrated plasma was passed through the column. In each case 100 ml fractions were collected and the citrate concentration in the Fractions determined.
In Tabelle I sind die Ergebnisse der Ionenkonzentrationen des Citrats für die vorstehenden Vergleichsversuche A 1) und A 2) aufgeführt. In Table I are the results of the ionic concentrations of the citrate for the above comparative experiments A 1) and A 2).
Tabelle I Entfernung von Citratplasma im Batch- und Chromatographieverfahren Batchverfahren Chromatographieverfahren Citrat (mäq/l) Citrat (mäq/l) Ausgangsmaterial (Citratplasma) 48,8 Ausgangsmaterial 48,8 1. Adsorption 24,5 Fraktion 1 0,15 2. Adsorption 11,9 Fraktion 2 0,37 3. Adsorption 4,4 Fraktion 3 1,29 Fraktion 4 3,01 Fraktion 5 6,28 Fraktion 6 13,7 Fraktion 7 30,6 B) Herstellung von Prothrombi1nkomplex-Konzentrat und lagerstabilen Serumproteinen Nach der Arbeitsweise von Beispiel IB und C des Hauptpatents wurden aus dem aus Citratplasma durch Verwendung von Ionenaustauschern gewonnenen Ionenaustauscherplasma der Stufe A ein Prothrombinkomplex-Konzentrat und eine Lösung lagerstabiler Serumproteine hergestellt. Table I Removal of Citrated Plasma by Batch and Chromatography Processes Batch process Chromatography process Citrate (meq / l) Citrate (meq / l) starting material (Citrated plasma) 48.8 Starting material 48.8 1st adsorption 24.5 Fraction 1 0.15 2nd. Adsorption 11.9 Fraction 2 0.37 3rd Adsorption 4.4 Fraction 3 1.29 Fraction 4 3.01 Fraction 5 6.28 Fraction 6 13.7 Fraction 7 30.6 B) manufacture of prothrombin complex concentrate and storage-stable serum proteins According to the procedure Examples IB and C of the main patent were made from citrated plasma by use Stage A ion exchange plasma obtained from ion exchangers is a prothrombin complex concentrate and prepared a solution of storage-stable serum proteins.
Beispiel 2 250 ml eines Kationenaustauscherharzes auf Basis Polystyrol/ Sulfonat (in der Wasserstoff-Form) und 375 ml eines Anionenaustauscherharzes auf Basis Polystyrol/Divinylbenzol/quartäres Amin (in der Hydroxyl-Form) wurden gemischt (Mischungsverhältnis von Kationen- zu Anionenaustauscher 1:1,5) und in ein Chromatographierohr gegeben. Über die Harzmischung wurden 1,45 1 Citratplasma gegeben. Die Tabelle II zeigt die Ergebnisse dieses Versuches.Example 2 250 ml of a cation exchange resin based on polystyrene / Sulfonate (in the hydrogen form) and 375 ml of an anion exchange resin Base polystyrene / divinylbenzene / quaternary amine (in the hydroxyl form) were mixed (Mixing ratio of cation to anion exchanger 1: 1.5) and into a chromatography tube given. 1.45 liters of citrated plasma were added over the resin mixture. Table II shows the results of this experiment.
Tabelle II Entfernung von Citrat- und Calcium-Ionen aus Citratplasma im Mischbettverfahren Ionenkonzentration in mäq/l Citrat Calcium Natrium Chlorid Ausgangsmaterial (Citratplasma) 66,1 4;15 216 83 Nach Chromatographie 1,74 0 84 (Ionenaustauscher-Plasma) Beispiel 3 A) Herstellung von Ionenaustauscherplasma In ein Chromatographierohr wurden 120 ml eines Kationenaustauscherharzes auf Basis Polystyrol/Sulfonat in der Natrium-Form gegeben. Über diese Säule wurde 1 1 Citratplasma gegeben. Anschließend wurde dieses Plasma über 180 ml eines Anionenaustauscherharzes auf Basis Polystyrol/ Divinylbenzol/quartäres Amin in der Chlorid-Form in einem zweiten Chromatographierrohr gegeben. Tabelle III zeigt die Ergebnisse dieses Versuches. Table II Removal of Citrate and Calcium Ions from Citrated Plasma in the mixed bed process ion concentration in meq / l citrate calcium sodium chloride Starting material (citrated plasma) 66.1 4; 15 216 83 After chromatography 1.74 0 84 (Ion exchange plasma) Example 3 A) Production of ion exchange plasma In a chromatography tube, 120 ml of a cation exchange resin based Polystyrene / sulfonate given in the sodium form. 1 l of citrate plasma was passed through this column given. This plasma was then poured over 180 ml of an anion exchange resin based on polystyrene / divinylbenzene / quaternary amine in the chloride form in one given second chromatography tube. Table III shows the results of this experiment.
Tabelle III Entfernung von Citrat- und Calciumionen aus Citrat-Plasma durch aufeinanderfolgende Adsorption Ionenkonzentration in mäq/l Citrat Calcium Ausgangsmaterial (Citratplasma) 64,0 4,10 nach Kationenaustauscher 63,0 0,60 nach Anionenaustauscher 0,49 0,60 (Ionenaustauscher-Plasma) B) Herstellung von lagerstabilen Serumproteinen und Fibrinogen 1 Liter des in Stufe A) erhaltenen Ionenaustauscher-Plasmas wurde zur Herstellung der lagerstabilen Serumproteine nach der Arbeitsweise von Beispiel 1C des Hauptpatents mit kolloidaler Kieselsäure behandelt. Nach Abtrennung der kolloidalen Kieselsäure wurde diese zweimal mit 500 ml 0,9%iger NaCl, die 60 mäq/l an Citrat enthielt, gewaschen. Table III Removal of Citrate and Calcium Ions from Citrated Plasma by successive adsorption ion concentration in meq / l citrate calcium Starting material (citrate plasma) 64.0 4.10 after cation exchanger 63.0 0.60 after Anion exchanger 0.49 0.60 (ion exchanger plasma) B) Production of storage-stable Serum proteins and fibrinogen 1 liter of the ion exchange plasma obtained in step A) was used for the production of the storage-stable serum proteins according to the method of Example 1C of the main patent treated with colloidal silica. After separation the colloidal silica was this twice with 500 ml 0.9% NaCl, the 60 containing meq / l of citrate, washed.
Die abzentrifugierte kolloidale Kieselsäure wurde zur Gewinnung des Fibrinogens zweimal mit 400 ml einer 10%igen NaCl-Lösung, die 60 mäq/l Citrat enthielt, für eine Stunde bei Zimmertemperatur extrahiert. Aus den Eluaten wurde das Fibrinogen durch Alkoholfällung isoliert, in citrathaltiger physiologischer NaCl-Lösung gelöst, steril filtriert und gefriergetrocknet. Tabelle IV onthält die Ergebnisse dieses Versuches.The centrifuged colloidal silica was used to obtain the Fibrinogen twice with 400 ml of a 10% NaCl solution containing 60 meq / l citrate, extracted for one hour at room temperature. The eluates became fibrinogen isolated by alcohol precipitation, dissolved in citrate-containing physiological NaCl solution, sterile filtered and freeze-dried. Table IV gives the results of this Try it.
Tabelle IV Fibrinogenherstellung
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0549964A2 (en) * | 1991-12-24 | 1993-07-07 | Octapharma Ag | Process for preparing a virus inactivated prothrombin complex concentrate |
| EP1568709A2 (en) | 2004-02-24 | 2005-08-31 | ZLB Behring GmbH | Purification of fibrinogen |
-
1979
- 1979-01-27 DE DE19792903131 patent/DE2903131A1/en not_active Withdrawn
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0549964A2 (en) * | 1991-12-24 | 1993-07-07 | Octapharma Ag | Process for preparing a virus inactivated prothrombin complex concentrate |
| EP0549964A3 (en) * | 1991-12-24 | 1994-07-13 | Octapharma Ag | Process for preparing a virus inactivated prothrombin complex concentrate |
| EP1568709A2 (en) | 2004-02-24 | 2005-08-31 | ZLB Behring GmbH | Purification of fibrinogen |
| EP1568709A3 (en) * | 2004-02-24 | 2005-11-02 | ZLB Behring GmbH | Purification of fibrinogen |
| EP2264069A2 (en) | 2004-02-24 | 2010-12-22 | CSL Behring GmbH | Purification of fibrinogen |
| EP2267025A2 (en) | 2004-02-24 | 2010-12-29 | CSL Behring GmbH | Purification of fibrinogen |
| EP2264069A3 (en) * | 2004-02-24 | 2011-05-04 | CSL Behring GmbH | Purification of fibrinogen |
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